纯化蛋白时,UV280、UV254、UV214分别表示什么?

如题所述

UV280用于检测蛋白质,蛋白组成中的Trp、Lys和Cys氧化形成的胱氨酸在280处有光吸收,可以用于蛋白检测或定量(补充:Phe侧链虽然有苯环结构,但其在260附近有较强光吸收,在280处几乎没有光吸收)
UV254主要用于检测核酸等在260处有光吸收的杂质
UV214主要用于检测肽键,吸收值较高,特异性相对较差。肽键光吸收的最大波长在210以下,其吸收峰波长范围较广,由于溶液中很多组分在该区域有干扰,所以才折中选择了214或者220用于肽键的检测。
通常看280、260就行了,但对于不含Trp、Lys、二硫键的蛋白,其280没有光吸收,无法检测,即使仅含二硫键其光吸收也很弱,这时使用214检测就是一个较好的替代方案。
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