《猫和老鼠》以闹剧为特色，描绘了一对水火不容的冤家：汤姆和杰瑞猫鼠之间的战争，片中的汤姆经常使用狡诈的诡计来对付杰瑞，而杰瑞则时常利用汤姆诡计中的漏洞逃脱他的迫害并给予报复
汤姆（猫）
演员 ---
总是闪着机会主义的光芒，弓着腰在一旁等待机会出击杰瑞。在动画片中，它总有一种强烈的欲望，总想抓住与它同居一室却难以抓住的老鼠杰瑞。但总是遭到失败。而实际上它在追逐中的乐趣远远超过了抓住杰瑞，即使偶尔抓住了杰瑞，也不知道怎么处理杰瑞，也许是他们在不知不觉中已经成为对方生活中不可或缺的一个角色了。
杰瑞（鼠）
演员 ---
总是用挑逗的眼神看着镜头，并且常常在不经意期间玩弄汤姆。因为杰瑞古灵精怪，所以经常能成功的戏弄汤姆且让他糗事百出，不过有时他也会被汤姆戏弄，时而在戏弄汤姆的同时也会享受到汤姆对它的关心，让它感动。
两只鞋太太（人）
演员 ---
动画中汤姆猫的几种不同主人中最常出现的一位，经常处理两位主角在自己家中所制造的麻烦。由于视角问题，镜头只能看到她腰以下的部位。在动画中的设定大约40岁左右，身材粗壮的大妈形象。1952年之后不再登场。
泰菲（鼠）
演员 ---
一个由杰瑞收养的小灰鼠弃儿，个体娇小可爱，通常穿白色尿布，非常贪吃，会讲法语，无时无刻在卖萌。
泰克（狗）
演员 ---
斯派克的儿子，经常被汤姆和杰瑞的打闹无辜牵连，是斯派克爆打汤姆的主要原因之一
斯派克（狗）
演员 ---
一只凶猛的斗牛犬，不管是汤姆有意拿他寻开心、还是捉杰瑞时不小心的、或者是杰瑞栽赃嫁祸的，汤姆总能招惹到他，因此总是被它暴打一顿。
布奇（猫）
演员 ---
一只肮脏的流浪猫，总想捉到杰瑞，因此有时会与汤姆合作，但更多时候却与汤姆为敌（大多是成为情敌）。登场的时候经常唱的歌曲是绿野仙踪的插曲《在彩虹上》。
图多盖洛（猫）
演员 ---
一位有富豪千金的母猫，经常在公园上看杂志，因为她的登场，常常让汤姆和布奇成为情敌。
莱特宁（猫）
演员 ---
首次登场时是与汤姆争宠为背景的，移动速度如同闪电，后来成为由布奇领导的“流浪猫铁三角”的一员，同时失去了闪电移动的能力。
托普斯（猫）
演员 ---
流浪猫铁三角的成员之一，身材矮小，比较喜欢搞怪。
小鸭子
演员 ---
鸭子妈妈的孩子，但也是最容易被忽略、抛弃的一只鸭子，之后杰瑞会帮助它找回它的妈妈。
金丝雀
演员 ---
被关在笼子里的一只小金丝雀（常被杰瑞放出），常常帮助杰瑞，是杰瑞的一位好朋友。由于此角色跟Quacker样子有些相似，会有人搞错角色，注意脚和尾巴的区分。（主要看它会不会飞）
笨蛋（猫）
演员 ---
一只棕色的流浪猫，原为流浪猫铁三角的一员头上有一撮红色的毛发。
《猫和老鼠》是由汤姆猫和杰瑞鼠搭档出演的一部经典短篇动画剧集。从1940年问世以来，猫和老鼠在国内的火热程度自然也不言而喻，90年代引进中国后更是得到成为了一部老少皆宜的动画片，给一代又一代不同年龄、不同国家的观众带来了无数欢乐。这套动画片完全以闹剧为特色，情节十分热闹，这部“机灵老鼠”与“笨猫”的故事，堪与《米老鼠和唐老鸭》的故事相媲美。
凭心而论，汤姆事实上是比杰瑞更有同情心的，这样的一只虽然有着各种各样的“缺点”的好猫，整天被一个小小的老鼠弄得狼狈不堪，确实让人于心不忍。汤姆易怒而敏感，杰瑞则独立且投机。在每集动画片的结尾，通常是杰瑞以洋洋自得来显示自己的胜利，而TOM则是悲壮的失败者。但是，也有可能出现以下结局：在很少的时候，汤姆会获得胜利；偶尔也有两人携手搭档的情况。不过，总得来说，汤姆和杰瑞握手言欢只能是小插曲——永无止境的追逐才是汤姆和杰瑞作为存在的永恒主题
当威廉·汉纳和约瑟夫·巴伯拉制作出“汤姆”和“杰瑞”这一对活宝的时候，他们大概没有想到自己的贡献有多大。这一对天生的冤家从诞生开始就注定了他们是给世界带来欢笑的，而他们是不会随着时间而褪色的。相反，他们在时间长河里浸泡越久，他们也会显得越有魅力，你也越会被感动。比起那些所谓有深度有意义的动画来说，汤姆和杰瑞的10分钟片断与其相比倒显得更具光辉