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western blot 要做3次平行吗
如题所述
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推荐答案 2017-04-06
所有的生物实验都要至少3次生物学平行实验以及技术重复
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western-blot
实验步骤
答:
(3)回收二抗。加入
Western
洗涤液,在侧摆摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟。吸尽洗涤液后,再加入洗涤液,洗涤5-10分钟。共洗涤
3次
。如果结果背景较高可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。7. 蛋白检测(Detection of proteins)(1) 参考相关说明书,可使用英格恩的Enlight等超敏ECL发光液来检测蛋白。(2...
做好
westernblot需要
注意各种细节,转给需要的你!
答:
最好不要在经销商购买分装的的PVDF膜,另一实验室一同学想着价格便宜也就只做几次,就从试剂公司只买了100cm2的膜,结果这价格虚高不说,而且膜还是假的,直到做完实验了才发现,蛋白样品也浪费了。所以建议还是购买Millipore公司原装的PVDF膜。 2.关于电转方式,有些采用湿转,有些采用半干转,两种方式均可。个人觉得...
western blot
的内参不一致,急求助
答:
我们知道,要用
Western Blot
比较不同条件下或者不同组织中,目的蛋白表达量的相对多少,前提条件是等量的细胞上样,才有比较的基础,特别表达量不高时,上样量的差别就很可能影响结果的分析,所以需要内参。在国外发表的文章中,Western
Blotting
实验结果须进行内参校正已成为一种惯例。但是,国内仍有不少科研人员在Western ...
western blot
三次
结果一般会差距多少才正常
答:
Western blot
检测最重要的意义在于目的蛋白在某细胞或组织中表达情况的定性。而目的蛋白检测的大小取决于目的蛋白在SDS-PAGE的结果,也就是说如果目的蛋白在SDS-PAGE上检测结果是偏大的,那么在Western blot转膜后也会是偏大的,这和目的蛋白的结构(糖基化修饰),,组成等等都有关系。所以只是一个相对...
western blot
为什么要两次免疫反应
答:
第一次免疫反应是为了让一抗结合目的蛋白,也可以说是让一抗特异性的识别出目的蛋白。达到检测的目的 第二次免疫反应时为了让二抗结合一抗,二抗上面有辣根过氧化物标记,结合一抗后就可以用ECL试剂反应,达到显影的效果 经过两次免疫反应后最终检测出目的蛋白 ...
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