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我构建了一个基因的真核表达载体,转染293T细胞后以空质粒PCDNA3.1及未转染质粒的孔为对照,还有一个以PBS
代替一抗的未转染质粒的孔为对照,结果只有PBS代替一抗的孔未被染色,其余孔都被染色。不知道什么原因。我怀疑是细胞中可能有可以和一抗反应的物质。不知道到底什么原因。有高手可以指点一下吗,谢谢
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推荐答案 2011-09-26
如果293T本身不表达这个蛋白的话,最大的可能是一抗质量不过关
你可以做一下免疫印迹看看。免疫组化假阳性多正常(非特异性吸附)。
免疫印迹Western blotting用分子量大小来判断,很难出假的。
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其他回答
第1个回答 2011-09-24
是目的基因的抗体做的么?
是不是293T本身表达这个蛋白?
第2个回答 2011-09-29
赢润生物技术支持 孙永林 加QQ12695920
第3个回答 2016-01-03
题目不完整,无法作答
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293T细胞
为什么经常用于
转染,
蛋白质
表达
答:
许多
真核表达载体
如
pcDNA3.1
中含有SV40病毒的复制起始位点,可以在表达SV40病毒T抗原的细胞系中复制,从而提高外源
基因的
表达水平。
293T细胞
就是一种表达SV40病毒T抗原的细胞系,它来源于人胚胎肾
细胞293
HEK。经改造后在其中插入了T抗原,因此用293T细胞做转染可以获得较高的表达水平。293T细胞也可以作为...
什么是蛋白质
转染
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是直接把表达出的目标蛋白转入细胞的过程,一般要用到辅助蛋白或构
构建
融合蛋白帮助目标蛋白进入细胞质,转染方法一般是共孵育。对于用一般方法进行基因转染效果很差的细胞系,可以考虑使用蛋白转染,但是因为基因没有导入,无法持续表达,因此只适用于瞬时转染。
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试剂好
答:
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不
表达的
问题~
答:
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293T细胞
为什么经常用于
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、蛋白质
表达
?
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如
pcDNA3.1
中含有SV40病毒的复制起始位点,可以在表达SV40病毒T抗原的细胞系中复制,从而提高外源
基因的
表达水平。
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就是一种表达SV40病毒T抗原的细胞系,它来源于人胚胎肾
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常用的真核表达载体的启动子有
真核表达载体转染入核
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