聚丙烯酰胺凝胶电泳，但是样品只停留在浓缩胶和分离胶之间？？？我延长了时间但是没用。分离胶4%浓缩胶7%

Question

如题所述

Answer 1

这种情况一般是分离胶太浓了，或者说蛋白比胶孔大，进不去。
你是说分离胶7%，浓缩胶4%吧？已经挺稀了，可能是蛋白沉淀了，凝聚成大块，所以进不去。这一般是样品太浓，变性时易沉淀。可以先稀释样品。
也可能是配胶时有错误，比如缓冲液pH不对，储液挥发浓缩等等。如果Marker也进不去，就是胶的问题；如果marker正常，就是样品问题。追问

是同工酶的，目前已经能分离到分离胶了，但是并不能在分离胶的中央。。。而且跑的时间现在是5小时了。。。。样品的稀释度是10倍

追答

“能分离到分离胶”是说已经进入分离胶，还是在分离胶与浓缩胶的界面处？如果是后者，就是蛋白颗粒太大，可能是你的同工酶本身就很大，也可能是酶凝聚了。
把信息说具体点，什么同工酶？样品浓度是多少？是变性胶吗？