坂本龙之介【CV横山智佐】
坂本龙马与坂本夫人的儿子。温柔善良，有责任感。因为新撰组的三人想完成坂本夫人的愿望，不让龙之介回到上海，而正在撮合龙之介与小夜子，可惜龙之介一直一头雾水。
近藤勇子【CV：折笠爱】
性格外向，大条，有种男孩子气，经常无厘头，却也有着很强的责任感。但经常搞错情况而弄出笑话。新选组前组长近藤勇的遗孤，在婴儿时代被战败的近藤夫妇放在了河边，被一家贫苦人家收养。而勇子知道自己的身份后因憧憬着父亲的武士道而努力成为了武士，开始了饥寒交迫的流浪生活，一直想买父亲的【虎澈】刀却没有钱。在贫苦和愿望的强大反差下偷了那把虎澈刀，被警视厅追捕。在被收押的时候被坂本夫人所救，以【成立新选组，为治安服务】的代价取消了罪行。现和土方、冲田一起住在坂本家。
一直思念着父母，想知道父母的模样，以至于受到蛊惑，灵魂被妖怪带走。在关键时候，坂本夫人那颗温暖的母亲之心把她唤了回来。勇子才发现，自己已经把坂本夫人当做亲生母亲般的存在。而坂本夫人也把她当亲生女儿一般照顾着。
土方岁绘【CV：松井菜樱子】
身着旗袍，性格冷淡的无表情少女，却总是出其不意的弄出搞笑点。枪法高超，为讨伐父亲的敌人：山县有朋而秘密加入新撰组。因为太过思念没有见过面却去世母亲，而拜托源内制造出来了一个作为自己母亲的机器人，因不知母亲长的什么样，所以机器人的面貌被设定为何自己一样。
土方岁三的遗孤。三人组中唯一一个不会用剑的人，武器为手枪。总是在关键时刻出现。
冲田薰/冲田熏【CV：池泽春菜】
性格外向，温柔爱笑的蓝黑发少女，新选组中最正常的人。十分擅长剑术和阴阳术，可以召唤四位式神。 为了达成坂本夫人的心愿而一直努力撮合着小夜子和龙之介。而在中途却发现自己对龙之介有了好感。
平时是位身着和服，配着剑的少女。在执行正规任务【比如追捕食灵妖怪时】会穿上淡紫偏蓝色羽织披风[和幕府末的新选组队服相同，只不过冲田薰的队服为粉蓝色]，头发扎成单马尾，腰上佩刀。
是冲田总司的遗孤，因幕府末期的新选组战败后，幼年的冲田薰没有了生活依靠。在桥下饥寒交迫即将冻死之时，被坂本夫人所救，并亲传她剑术。
在原作中被设定为有着半妖的血统，因此可以使用阴阳术并召唤式神。
猫丸【CV：田中真弓】
一只无厘头的猫妖。
坂本凉子
机动新撰组的社长，坂本龙马的夫人，龙之介的母亲。收养了近藤土方和冲田的人。性格温柔慈爱，充满着母性的光辉。因为龙之介要回香港的事而发愁着。
平贺源内【CV：三木真一郎】
擅长机械制作，拥有丰富的科学知识，经常制作各种检测妖怪的机器人，土方的母亲机器人就是出自他之手。
弓月新太郎【CV：野岛健儿】
为了还债而不得不加入新撰组的弓月·新太郎——自感正义但是脾气温顺，身兼参谋和帐务的职务。 机动新撰组的竞争对手。组内人员为早乙女美姬【组长】，田中右近和铃木左近 。
早乙女美姬【CV:笠原留美】早乙女美姬，早乙女家的大小姐，也是与新撰组竞争着的燕组的组长。身边的部下是田中右近和铃木左近 。 性格傲娇，热爱吐槽，一副大小姐诶的模样。而实力确实不可小觑。但也经常会被突发情况弄得忙手忙脚。
田中右近【CV：草尾毅】
早乙女家的从者。自称“美姬的右手，同心一体”。经常吐机动新撰组的槽。
铃木左近【CV:中嵨聡彦】
身材壮实，原相扑选手。服伺早乙女家的人。 一共四个，全部为人类少儿的样子，可以在空中飞的很小的类似于精灵的东西。有着特殊的能力。
青龙：安田美和
白虎：前田このみ
朱雀：今野宏美
玄武：金田朋子 山崎小夜子【CV：满仲由纪子】
西点厅的帮手少女，温柔可爱，很受人们喜爱。对于新撰组撮合她和龙之介一事同样感到一头雾水。 主要出自第七集，是已经死去的被在神社供奉的人。
一共有四位，全部出自日本古典名著《源氏物语》，一部让日本人骄傲了一千年的作品。但在本动画中的这些人物是被修改后的搞笑化，并不是原作源氏物语中的形象。
六条御息所
被冲田所召唤出来的神少女，双面性个人物，个性娇蛮任性，把三人组耍的团团转。而实际上是为了寻找曾经的爱人【光源式】才继续留在人世，而寻找爱人的原因便是——惩罚背叛过她的爱人，追着冒充爱人的右近满世界跑，并毁坏了城市的大半部分，使新撰组负债累累。
原形出自日本古典名著《源氏物语》，是东宫太子所宠爱的太子妃，但是她却爱恋着比她小七岁的光源氏，也是光源氏的恋人（情妇）之一。最后幡然醒悟自己是得不到光源氏的爱的而心灰意冷脱身而出，但却因为过于怨恨和她有过节的葵上（葵姬）而在睡梦中灵魂出窍骚扰葵上，导致葵上死亡。但她可以说是整部作品中最爱光源氏的女子，却也是最悲哀的女子。
光源式
六条御息所的爱人，疑似花花公子。对六条御息所说了一句话而俘获了她的欢心。在动画中的经典名句是：美丽的少女，宛如凄美的树。惜我愚钝，不能留住旷世的容颜。原形出自日本古典名著《源氏物语》，是天皇最宠爱的二皇子。有着如同仙人一般的美貌和才华，被称为昭华公子。其母桐壶更衣是天皇唯一真心爱着的人。但其母因为父亲已经去世，没有强大的外戚保护，加上天皇只爱她，所以被其他人所嫉妒。最终在其他人的嫉妒和迫害中抑郁而死。天皇为了保护没有外戚帮助的光源氏而不得已把他削为臣籍。而光源氏也由于复杂的身世背景而导致人性复杂，因其美貌而且才华横溢，一生得到众多女子的青睐。但总体来说，光源氏爱着他的每个爱人。
夕颜、葵上
面容温婉美丽的两位少女，光源氏的爱人，六条的死敌，经常和六条打架、吵架。据葵上说，她们是被六条害死 。
原形出自日本古典名著《源氏物语》，都是被六条御息所的生灵所害死的。
夕颜出身贫寒，眉目清秀、善良且天真无邪，是头中将的情人。后来被光源氏看上，成了光源氏的情人之一。后来被六条御息所的生灵害死，年仅19岁。她死后光源氏抑郁而疾，思念不已。
葵上（葵姬）出身高贵，性格清冷稳重，极其美丽，是光源氏的正妻。是天皇和左大臣出于政治目的以及对光源氏的保护而指婚的。但或许是两人没有感情磨合期，而光源氏认为对正妻和情人的态度是不同的，导致两人感情冷淡，并且互相抱怨对方不理睬自己。最后在葵上被六条的生灵缠绕而病，并且当时葵上正在怀孕，光源氏终于开始在意葵上，两人有了真正的感情。在幸福来临的前一刻，葵上最终去世了。
