1．展开剂的选择
选择展开剂须视被分离物的极性及支持剂的性质而定。对初选展开剂合适与否的评价，要根据其分离有效成分的效果来确定。如果不合适，还需进行极性调整，直到达到对有效成分的完全分离为止。
如果薄层层析所用的支持剂是吸附剂，在同一吸附剂上，不同化合物的吸附性质有如下规律：①饱和碳氢化合物不易被吸附；②不饱和碳氢化合物易被吸附，分子中双键愈多，则吸附得愈紧密；③当碳氢化合物被一个功能基取代后，吸附性增大。吸附性较大的化合物，一般需用极性较大的溶剂才能推动它。
选择展开剂的另一个依据是溶剂的极性大小。一般而论，在同一种支持剂上，凡溶剂的极性愈大，则对同一性质的化合物的洗脱能力也愈大，即在薄层上能把此化合物推进得愈远，Rf值也愈大。如果用一种溶剂去展开某一成分，当发现它的Rf值太小时，可考虑换用一种极性较大的溶剂，或在原来的溶剂中加入一定量极性较大的溶剂进行层层。溶剂极性大小的次序是：
石油醚<二硫化碳<四氯化碳<三氯乙烯<苯<二氯甲烷<氯仿<乙醚<乙酸乙酯<乙酸甲酯<丙酮<正丙醇<甲醇<水。
2．展层
展层装置种类较多，根据展层方式基本上可分上行、下行、连续及水平式四种。不加粘合剂的薄层只能作近水平式(板与水平成10度～20度角)的上行或下行展开。不论何种展层方式，展层容器必须关闭，并事先要使展开剂蒸气达到饱和。容器的体积大小要视薄层板的面积而定，因为大容器要达到溶剂蒸气饱和所需的时间比小的长。根据实验证明，在不饱和的展层装置中，由于混合展开剂内含有几种挥发性试剂，致使薄层板边缘与中间的试剂比例不同，因此样品在边缘和中间展层的距离也不同，这种现象称为边缘效应，严重时会影响分离效果。
薄层层析时为了获得更好的分离效果，可采用双向展层和分次展层。分次展层是先用一种溶剂展开至一定距离后，将薄层板取出，待溶剂挥发后再按同一方向用第二种溶剂展开。
