如何降低植物体内可溶性蛋白含量

Question

如题所述

Answer 1

植物体内可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定 摘要： 目的 通过标准曲线的绘制， 测定白菜、 芹菜、 菠菜中可溶性蛋白和可溶性糖的含量， 了解可溶性糖和可溶性蛋白的测定方法。 方法 分别用蒽酮法和考马斯亮蓝染色法来测定植 物体内可溶性糖和可溶性蛋白的含量。结论 关键词：白菜；芹菜；菠菜；可溶性蛋白含量；可溶性糖含量；蒽酮法；考马斯亮蓝染色法 1 引言 植物体内的可溶性糖和可溶性蛋白含量是重要的生理生化指标。 在作物的碳素营养中， 作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。 它们在营养中的作用主 要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他 许多有机物合成的原料， 如糖在呼吸过程中形成的有机酸， 可作为 NH 3 的受体而转化为氨 基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。由于 碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。 可溶性蛋白是植物体内氮素存在的主要形式， 其含量的多少与植物的代谢和衰老有密切 的关系，同时它与植物体维持渗透压抗脱水也有很大关系。 白菜是十字花科芸薹属叶用蔬菜，味道鲜美可口，营养丰富，素有“菜中之王” 的美称， 为广大群众所喜爱。芹菜属伞形科植物， 富含蛋白质、碳水化合物、胡萝卜素、B 族维生 素、钙、磷、铁、钠等，同时，具有有平肝清热，祛风利湿，清肠利便、润肺止咳、降低血 压、健脑镇静的功效。菠菜藜科一年生草本植物，菠菜含有丰富的维他命 A、维他命 C 及 矿物质，它对各种贫血症和糖尿病、肺结核、高血压、风火赤眼等诸多疾病可起辅助治疗作 用。 2 材料与方法 2.1 植物体内可溶性糖含量的测定 2.1.1 材料 新鲜的白菜、芹菜、菠菜叶片（剪碎后各取 0.5—1.0g） 2.1.2 试剂 葡萄糖标准溶液（200ug/ml)、蒽酮试剂 2.1.3 仪器设备 分光光度计；分析天平；恒温水浴；试管；三角瓶；移液管；剪刀；玻璃棒；滤纸；研 钵 2.1.4 测定方法 样品中可溶性糖的提取： 称取剪碎混匀的新鲜样品 0.5 ～1.0 g（或干样粉 5～100 mg ） ， 放入大试管中，加入 15 ml 蒸馏水，在沸水浴中煮沸 20 min，取出冷却，过滤入 100 ml 容 量瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度。 标准曲线制作：取 6 支大试管，从 0～5 分别编号，按下表加入各试剂。 试剂 0 200ug/ml 葡萄糖标准溶液（ml） 蒸馏水（ml) 蒽酮试剂（ml） 葡萄糖量（ug） 0 1.0 5.0 0 1 0.2 0.8 5.0 20 2 0.4 0.6 5.0 40 管号 3 0.6 0.4 5.0 60 4 0.8 0.2 5.0 80 5 1.0 0 5.0 100 将各管快速摇动混匀后，在沸水浴中煮 10 min，取出冷却，在 620nm 波长制标准曲线。 样品测定：取待测样品提取液 1.0ml 加蒽酮试剂 5ml ，同以上操作显色测定光密度。 重复 3 次。 结果计算： 可溶性糖含量（%）=从标准曲线查得糖的量（μ g）×提取液体积（ml）×稀释倍数/ 【测定用样品液的体积（ml）×样品重量（g）×106】×100 2.2 植物体内可溶性蛋白含量的测定 2.2.1 材料 新鲜的白菜、芹菜、菠菜叶片（剪碎后各取 0.5—1.0g） 2.2.2 试剂 标准蛋白质溶液：用牛血清白蛋白配成含蛋白质 100μ g/的标准蛋白溶液; 90%乙醇；85%磷酸(W/V)；考马斯亮蓝 G－250 溶液 2.2.3 仪器设备 分光光度计；量筒；研钵；烧杯；量瓶；移液管；具塞刻度试管；分析天平；恒温水 浴； 2.2.4 测定方法 0～100μ g/ml 标准曲线的制作：取六支试管，分别按下表数据配制 0～100μ g/ml 血清 白蛋白液 1ml。准确吸取所配各管溶液 0.1ml，分别放入 10ml 具塞试管中，加入 5ml 考马斯 亮蓝 G—250 试剂，盖塞，反转混合数次，放置 2min 后，在 595nm 下比色，绘制标准曲线。 管号 100 μ g/ml 牛血清 蛋白量（ml） 蒸馏水量（ml） 蛋白质含量 g） （μ 1 0 1.0 0 2 0.2 0.8 20 3 0.4 0.6 40 4 0.6 0.4 60 5 0.8 0.2 80 6 1.0 0 100 样品提取液中蛋白质浓度的测定：吸取样品提取液 1.0ml，放入具塞试管中(每个样品 设置两个重复)，加入 5Ml 考马斯亮蓝 G－250 溶液，充分混合，放置 2min 后在 595nm 下 比色，记录吸光值，并通过标准曲线查得蛋白质含量。 结果计算： 样品蛋白质含量(mg/g 鲜重）=(C*V/a)/W 式中 C－查标准曲线所得每管蛋白质含量（mg） ； V－提取液总体积（ml） ； a－测定所取提取液体积（ml） ； W－取样量（g） 。 3 结果分析 3.1 植物体内可溶性糖含量的测定 3.1.1 可溶性糖标准曲线 表一：各试管中标准葡萄糖的吸光值 管号 葡萄糖含量 （ug） 吸光度 0 0 0 1 40 0.195 2 80 0.370 3 120 0.518 4 160 0.690 5 200 0.706 3.1.2 芹菜、白菜、菠菜中可溶性糖的吸光值 吸光值 芹菜 A1 A2 A3 平均值 0.358 0.361 0.367 0.362 白菜 0.347 0.352 0.351 0.350 样品名称 菠菜 0.333 0.327 0.327 0.329 对照标准曲线，可以得出：在 1g 蔬菜样品中移取的 1ml 样品溶液中，芹菜样品溶液含 糖量为 80.930μg；白菜样品溶液的含糖量为 78.139μg；菠菜样品溶液的含糖量为 73.256μg。 3.1.3 可溶性糖含量计算 样品含糖量=样品含量（ug）*稀释倍数*100/{样品重（g）*10 }g/100g 鲜重 样品 芹菜 白菜 菠菜 质量/g 1.00 1.00 1.00 吸光值 0.362 0.350 0.329 查表所得含 糖量/μg 80.830 78.139 73.256 稀释倍数 100 100 100 可溶性糖含量 /μg 0.8083 0.7813 0.7325 6 由表可知：芹菜中可溶性糖含量最高，白菜中含量居中，菠菜中可溶性糖含量最低。 3.2 植物体内可溶性蛋白含量测定 3.2.1 可溶性蛋白标准曲线 表 1 各试管中标准蛋白质的吸光值 管号 蛋白质含量 (ug) 吸光度 0 0 0 1 20 0.286 2 40 0.578 3 60 0.852 4 80 0.921 5 100 1.250 3.2.2 芹菜、白菜、菠菜中可溶性蛋白的吸光值 吸光值 A1 A2 A3 平均值 样品名称 芹菜 0.095 0.102 0.097 0.098 白菜 0.122 0.125 0.128 0.125 菠菜 0.085 0.081 0.080 0.082 照标准曲线，可以得出：在 1g 蔬菜样品中移取的 1ml 样品溶液中，芹菜样品溶液含蛋 白量为 4.619μg； 白菜样品溶液的含蛋白量为 6.761μg； 菠菜样品溶液的含蛋白量为 3.349μg。 3.2.3 可溶性蛋白计算 样品中蛋白质含量 ? C——查标准曲线值， ug VT——提取液总体积， ml Vs——测样时加样量，ml WF——样品鲜重，g 样品 芹菜 白菜 菠菜 蛋白质含量 C(ug) 4.619 6.761 3.349 C *VT (mg / g) V *W *1000 S F 提取液总体 积 VT（ml） 5.0 5.0 50. 测样时加样 量 Vs（ml） 1.0 1.0 1.0 样品鲜重 WF（g） 1.0 1.0 1.0 样品中蛋白 质 含 量 （mg/g） 0.023 0.034 0.016 由表可知：白菜中可溶性糖含量最高，芹菜中含量居中，菠菜中可溶性糖含量最低。 4 讨论 通过实验对芹菜、白菜和菠菜体内的可溶性糖和可溶性蛋白的含量进行了测定