sds page蛋白电泳只有maker跑出带了,样品颜色很深看不出带是怎么回事

如题所述

一般这种情况是上样量太大的缘故,你做PAGE之前有对样品蛋白进行初步定量麽?SDS-PAGE对上扬的蛋白量是有要求的,上样过大就会跑成一片看不到条带。追问

会不会是loading buffer放的太多,样品太少?

追答

不会,因为loading buffer会跑在最前沿而成为一条蓝色的细线,那条细线最后在染色前是要求切掉的。此外样品太少的的话,如果脱色时间够长也会看到有微弱的条带。

追问

确实很微弱 OTL特别微弱 样品的整条带颜色和marker蛋白带颜色差不多,所以样品蛋白看不清,特别模糊

追答

还是那句话,你应该在电泳前对蛋白进行初步定量,最简单的就是用分光光度计测280nm的吸光度,按照小牛血清蛋白的标准曲线对浓度进行初步定量(每0.6OD的吸光度为1mg/ml)。然后再上合适的样品上去。如果你实在是没办法获得理想浓度的蛋白的话,那么建议换染色方法,使用灵敏度更高的银染法。

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第1个回答  2012-04-15
和样品本身有关,一般菌液都很深
可以用胶体考马斯染色试试
第2个回答  2012-04-15
saber...
什么染色啊 不会没染色吧。。。追问

考马斯亮蓝,样品从槽到底都是蓝色,蛋白几乎看不出来

追答

恩 楼下说的有道理

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