台盼蓝染色原理

Question

如题所述

Answer 1

台盼蓝染色的原理：台盼蓝能够穿过死细胞的细胞膜，使得其中的DNA着色，在光学显微镜下观察到蓝色沉淀，从而可以判断细胞是否死亡。由于台盼蓝无法进入活细胞内部，因此无法使细胞的DNA着色。以下是台盼蓝染色的主要步骤（以计数培养的动物细胞为例）：
1. 使用Hanks液配制0.1%的台盼蓝溶液。Hanks液主要用于细胞培养过程中的组织块漂洗、细胞漂洗以及配制其他试剂。
2. 使用0.5%胰蛋白酶和0.2%EDTA的混合液消化培养的贴壁细胞。
3. 加入适量的Hanks液制成细胞悬液。
4. 将待染色的细胞适当稀释至所需浓度。
5. 每0.1ml细胞悬液中加入新鲜配制的染液一小滴，室温下染色3至5分钟。
6. 染色后的细胞材料，取一滴细胞悬液置于血细胞计数板上，在高倍镜下观察并计数。
7. 死细胞呈浅蓝色且体积膨胀，无光泽；活细胞不着色且保持正常形态，有光泽。
8. 计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数量。
9. 统计未染色的细胞。
10. 根据公式计算细胞活率：细胞活率（%）=未染色的细胞数/观察的细胞总数×100%。
注意事项：染色时间不宜过长，否则活细胞也可能逐渐积累染料而着色，导致检测结果偏低。