DNA提取试剂盒与苯酚氯仿提取DNA法的异同

Question

这两个方法有什么区别？那个比较好？有什么要主意的吗？

提取试剂盒的详细步骤是什么？

Answer 1

酚－氯仿方法是提取核酸的经典方法，主要原理是利用核酸、蛋白等杂质在水相和有机相中溶解度不同而重新分配。

试剂盒原理是在特定溶液环境下（高盐、低pH)使核酸吸附在固相介质（一般是硅胶膜）上，洗涤去除杂质后，再改变溶液环境使DNA溶解到纯水或TE中。

酚氯仿方法经典、便宜，用的都是实验室常用试剂，提纯效率和纯度都很高，但缺点是费时费力，苯酚和氯仿还有一定毒性，我见过的实验室很少有用这种方法的。

试剂盒严格来说也分好多种，经典的是离心柱的，就是把硅胶膜固定在离心管中，类似于超滤膜，用离心力或者负压让液体通过硅胶膜，核酸就留在膜上。在经过洗涤、洗脱的步骤得到核酸。这种方法的优点是操作简单、时间短，现在也能达到很高的质量，价格也不贵。缺点是不易放大，需要多次离心。

试剂盒基本步骤是先使样本裂解，在特定溶液中通过离心流过硅胶膜，再经过几次洗涤，最后加上洗脱液，离心后核酸就溶解到洗脱液中。具体的你可以根据你自己的需要到网上查一下说明书，现在做试剂盒公司的很多，步骤大同小异。

试剂盒也不是一定很便宜，对一些难度高（病毒核酸、法医样本核酸）或者要求高（去内毒素）的用途也比较贵。还有一种磁珠法提取，不需要离心，易于放大，可以用于自动化操作。这种高端一点的产品基本上是外国公司垄断的。

国内也有一批人在做这种磁珠，希望能打破这种垄断。上海交大的古宏晨教授和他创立的上海奥润微纳就是这批人的代表。（有点打广告的嫌疑，看在码了这么多字的份上也可以理解哈）

核酸提取试剂盒的学问很多，有兴趣的话还可以再交流。：）

Answer 2

酚－氯仿方法是提取核酸的经典方法，主要原理是利用核酸、蛋白等杂质在水相和有机相中溶解度不同而重新分配。
试剂盒原理是在特定溶液环境下（高盐、低pH)使核酸吸附在固相介质（一般是硅胶膜）上，洗涤去除杂质后，再改变溶液环境使DNA溶解到纯水或TE中。
酚氯仿方法经典、便宜，用的都是实验室常用试剂，提纯效率和纯度都很高，但缺点是费时费力，苯酚和氯仿还有一定毒性，我见过的实验室很少有用这种方法的。
试剂盒严格来说也分好多种，经典的是离心柱的，就是把硅胶膜固定在离心管中，类似于超滤膜，用离心力或者负压让液体通过硅胶膜，核酸就留在膜上。在经过洗涤、洗脱的步骤得到核酸。这种方法的优点是操作简单、时间短，现在也能达到很高的质量，价格也不贵。缺点是不易放大，需要多次离心。
试剂盒基本步骤是先使样本裂解，在特定溶液中通过离心流过硅胶膜，再经过几次洗涤，最后加上洗脱液，离心后核酸就溶解到洗脱液中。具体的你可以根据你自己的需要到网上查一下说明书，现在做试剂盒公司的很多，步骤大同小异。
试剂盒也不是一定很便宜，对一些难度高（病毒核酸、法医样本核酸）或者要求高（去内毒素）的用途也比较贵。还有一种磁珠法提取，不需要离心，易于放大，可以用于自动化操作。这种高端一点的产品基本上是外国公司垄断的。

Answer 3

离心柱法的试剂盒提取，主要是利用裂解液促使细胞破碎，是细胞中的核酸释放出来；苯酚氯仿提取dna，特点是dna的纯度高，片段大，效果也较好，但是较为复杂。BIODAI的dna提取具体步骤如下：1.
请自行准备：无水乙醇、1.5mL离心管。2.
取出洗涤液，按以下操作：a)
洗涤液A：21mL加入9mL无水乙醇；42mL加入18mL无水乙醇。b)
洗涤液B：9mL加入21mL无水乙醇；18mL加入42mL无水乙醇。c)
配制好的洗涤液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。3.
取1.5mL离心管，加入200μL样本，4μLDNA
Carrier混合均匀，加入300μL
裂解液及20μL
消化液，振荡混匀，56℃水浴10
分钟。4.
加入1000μL无水乙醇，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响DNA的提取与后续实验。5.
将吸附柱放入收集管内，将760μL上述溶液转入吸附柱内，静置2
分钟，12,000
rpm
4℃离心1
分钟，弃收集管内废液；6.
将吸附柱放回收集管内，将剩余760μL溶液转移至吸附柱内，重复步骤5。7.
将吸附柱放回收集管内，加500μL
洗涤液A至吸附柱内，12,000
rpm
4℃离心1
分钟，弃收集管内废液。8.
将吸附柱放回收集管内，加500μL
洗涤液B至吸附柱内，12,000
rpm
4℃离心1
分钟，弃收集管内废液。9.
将吸附柱放回收集管内，12,000
rpm
4℃离心2
分钟，离去残留的洗涤液。取出吸附柱，放入新的1.5
mL
离心管内，加入30-50
μL
洗脱液，静置3
分钟，12,000
rpm
4℃
离心2
分钟，收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存