请教紫外吸收法测定核酸含量的相关问题

Question

当时老师只在那个实验仪器上演示了一遍，没有看懂。
简单的说提取了RNA后，怎么使用那台仪器进行测量呢？具体点的话，测试液有什么要求，然后按按钮经过仪器得到的结果是什么。还有后续计算吗？？怎么算，还有什么OD值，和测量有什么关系。。。。多谢指教！！！！
请问一楼,我知道仪器给出的是两个值,一个与浓度有关,一个和纯度有关,那么仪器是直接给出浓度的值吗?比如多少微克每微升...还是需要后续计算的?如果需要,如何计算~

Answer 1

首先附上紫外分光光度计使用操作规程如下：

仪 器: 紫外分光光度计
型 号: UV2501
产 地: 日本岛津公司
主要配件: 主机,计算机,不间断电源
性能指标:
波长范围:190～1100nm 分 辨 度:≤0.15nm
光 栅:1200L/mm 精 度:±0.2nm
注意事项:
1. 不要将实验药品,试剂,器皿等放在仪器
2. 光度计光源使用寿命有限, 长时间不用仪器请关闭紫外光度计
3. 实验结束,及时登记《大型贵重精密仪器设备履历书》
实验步骤:
1. 打开主机,打开计算机,启动紫外分光光度计程序,并设置(方法如下)
2. 将待测试装样品放入样品池中并测试
以下为计算机软件操作:
1. 双击2501,启动紫外分光光度计程序
2. 扫基线,按程序下放的"baseline"(此时不放样品)
3. 打开Configure菜单,点击Parmeters,根据实际情况设定参数(如扫描范围,步进,扫描速率等等)
4. 测量,按start键,进行测量
5.峰位置的确定:
(1) 电脑确定:点击"Manipnlate"菜单中"Peak Pick"项,出现一对话框,将光标移至对话框最上方(此时箭头变为" "),按下左键不放,拉动对话框至所想大小,即可读出峰高,峰位置等
(2) 手动确定:点击"Manipnlate"菜单中"Data print"项,处理方式同上,自己读出自己想要的位置的峰值.点击"Manipnlate"菜单中"Point pick"项,移动起始和终点位置线,人为确定峰的起始,终点位置

具体到RNA测定则是将10微升RNA溶液放入样品池中选择260 nm波长与280 nm波长对其进行吸光度值扫描。一般来说，测核酸浓度都是用260nm的光吸收值来决定，同时用260/280的比值来判断有无蛋白质污染。理想的比值是1.8～2.0左右。
仪器经过光度扫描后会直接生成浓度值显示在屏幕上，不需要经过后续的人工计算获取。
希望能够对你有所帮助。

Answer 2

就是把RNA溶液10微升左右加到比微量色皿里，然后测量在280纳米和260纳米处的吸光值之比。一般来说，测核酸浓度都是用260nm的光吸收值来决定，同时用260/280的比值来判断有无蛋白质污染。理想的比值是1.8~2.0左右。

这个是和你购买的仪器有关啊。有的仪器是直接给出吸光度，有的是可以计算比值并告诉你浓度的。反正我实验室的仪器是直接能计算出核算浓度的，比色皿里需要上样10微升。