我想做胰岛素导入大肠杆菌的基因克隆实验。在ncbi中查找到了cdna，准备跑pcr，这个时候需要提取出cdna模

Question

需要从人体中提取cdna模版吗？还是去基因公司合成基因片段比较好？pcr可以只提供基因序列，不提供基因模版做吗

Answer 1

　　PCR必须有模板。
　　通过RT-PCR获得胰岛素cDNA很麻烦，因为表达胰岛素mRNA的组织或细胞非常局限。你要么需要找到人的B细胞系（这个细胞系不好要也不好养），要么需要联系医院获得人的胰腺组织。这两条路都比较麻烦。
　　可行的办法有几个：要么是全基因合成，大概3元/碱基。要么是联系origene公司购买胰岛素cDNA，价格不贵，不比你自己克隆cDNA成本高。要么直接联系其它实验室，所要胰岛素cDNA。

Answer 2

如果你打算PCR的话，模板是必须的，这个模板可以从胰岛贝塔细胞中的mRNA反转录而来。考虑到胰岛素仅有51个氨基酸，意味着CDNA只有153个碱基对，钱多的话，可以直接合成模板。个人意见供参考。