DNA聚合酶的作用是催化DNA的复制,即将原料脱氧核糖核苷酸 通过引物与模板链进行配对,合成新的DNA单链.
DNA连接酶则是将两段分开的DNA链通过特定末端连接在一起.
DNA聚合酶
DNA聚合酶（DNA polymerase）是细胞复制DNA的重要作用酶。DNA聚合酶 , 以DNA为复制模板，从将DNA由5'端点开始复制到3'端的酶。DNA聚合酶的主要活性是催化DNA的合成（在具备模板、引物、dNTP等的情况下）及其相辅的活性。
定义
真核细胞有5种DNA聚合酶，分别为DNA聚合酶α（定位于胞核，参与复制引发，不具有5'－3'外切酶活性及3'－5'外切酶活性，有5'－3'聚合酶活性），β（定位于核内，参与低保真度复制，不具有5'－3'外切酶活性，其中疑似存在5'－3'聚合活性，不具3'－5'外切酶活性），γ（定位于线粒体，参与线粒体复制，均具有5'－3'外切酶活性、5'－3'聚合活性及3'－5'外切酶活性），δ（定位核，参与延长子链及错配修复，均具有5'－3'外切酶活性、5'－3'聚合活性及3'－5'外切酶活性），ε（定位于核，参与损伤修复，均具有5'－3'外切酶活性、5'－3'聚合活性及3'－5'外切酶活性）。
原核细胞：在大肠杆菌中，到目前为止已发现有5种DNA聚合酶，分别为DNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ，都与DNA链的延长有关。DNA聚合酶I是单链多肽，可催化单链或双链DNA 的延长，于1956年发现；DNA聚合酶II则与低分子脱氧核苷酸链的延长有关；DNA聚合酶III在细胞中存在的数目不多，是促进DNA链延长的主要酶。DNA聚合酶Ⅳ和Ⅴ直到1999年才被发现。
DNA连接酶（DNA Ligase）也称DNA黏合酶，在分子生物学中扮演一个既特殊又关键的角色，那就是连接DNA链3‘-OH末端和，另一DNA链的5’-P末端，使二者生成磷酸二酯键，从而把两段相邻的DNA链连成完整的链。连接酶的催化作用需要消耗ATP。
定义
DNA连接酶也称DNA黏合酶，在分子生物学中扮演一个既特殊又关键的角色，那就是把两条DNA黏合成一条。无论是双股或是单股DNA的黏合，DNA黏合酶都可以借由形成磷酸双脂键将DNA在3'端的尾端与5'端的前端连在一起。虽然在细胞内也有其他的蛋白质，例如像是DNA聚合酶在其中一股DNA为模版的情况下，将另一边的DNA单股断裂端，通过聚合反应的过程形成磷酸双脂键（phosphodiester bond）来黏合DNA(DNA连接酶将DNA片段缝合起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸双脂键)。但是DNA聚合酶的黏合过程却只是聚合反应一个附带的功能而已，真正在细胞内扮演DNA黏合反应的工作还是以DNA黏合酶为主。DNA黏合酶的功能便是黏合断裂的DNA，而细胞内只有DNA复制与DNA修复的反应牵涉到DNA断裂的合成，因此DNA黏合酶就是在上述的两个机制扮演重要的角色。除了细胞内的黏合反应，随着分子生物学的进展，几乎大多数的分子生物实验室都会利用DNA黏合酶来进行重组DNA的实验，或许这也可以被规类为其另一种重要的功能。
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