怎样从小鼠肺组织中提取总蛋白？第一次做，也没人教，希望步骤越详细越好！蛋白提取液和裂解液一样吗？

Question

如题，还有，真个过程中需要用到那些试剂和器材呢？不胜感激
需要每个组取同样量的组织吗？还是最后定量总蛋白就可以了？
加液氮研磨的时候该在什么器具中进行呢？

Answer 1

你好，提取总蛋白需要蛋白酶抑制剂和裂解液。一般是1：1进行配制。用的裂解液我们是RIPA。
将组织用液氮研磨碎了，然后按量加入裂解液，细胞量在10七次方左右是100微升。冰浴裂解20分钟（间断摇动）。然后4摄氏度离心12000rpm，15分钟。吸取上清定量。根据测定量的结果将各样品总蛋白量调匀，然后等体积加入loadingbuffer就可以电泳了。

你好，因为你最后取得是蛋白量，所以保证最终的总蛋白是相同的量就好了，组织只是提取的介质，我们定量的是最终的蛋白，而并非组织样品的蛋白含量。如果你想区分两种不同组织的蛋白含量是不同的，才会用到相同组织量。

在普通陶瓷研钵中就能进行，而且研钵可以不一次性使用。研钵处理的时候需要用锡纸包裹好，通过干热法灭菌，120℃烘箱。当然之前要洗干净。

Answer 2

做wb么 就用提细胞的蛋白裂解液 组织先用液氮冷冻 然后用研磨磨成粉 磨的过程中要加入液氮 不然比较难成粉末 其实大部分情况都很难成粉末就是。。。 一般最后都是黏糊糊的在那。。。 然后刮下来放到管子里 再加裂解液 剩下就跟提细胞的一样啦 裂解时间长一点罢了
取差不多大小的就行了 反正你做WB都是要用GAPDH或者ACTIN归一化的

研钵。。。。。或者找一些你们买东西的生物公司问问有没有磨组织的东西卖 一种管子加棒子的东西。。。本回答被网友采纳

Answer 3

你好，我做的是脂肪组织中提取总蛋白，是在直径10cm的大皿中收的样，每个皿中加300ul RIPA（含各种浓度的蛋白酶抑制剂）。
蛋白提取液就是RIPA裂解液（注：还有一种是裂解液叫Trizol，是RNA提取液）。
用到的有，收样用的：蛋白酶抑制剂，RIPA，PBS，塑料刮刀，EP管，
蛋白变性用的：100℃，65℃，BCA试剂盒定量
后面处理好后就放-80℃保存，做wb时再拿出来用。