tricine蛋白电泳染色后怎么没有条带

如题所述

推荐答案 2017-07-19

胶的配方改进了么?
浓缩胶：1ml 含0.4% SDS的3M Tris-HCl,pH8.45
0.5ml 甲叉/双甲叉（29：1）
2.5 ml ddH2O
4ul 40% AP
16ul TEMED
分离胶：2.4 ml 聚乙二醇
2ml 含0.4% SDS的3M Tris-HCl,pH8.45
3.6 ml 甲叉/双甲叉（19：1）
4ul 40% AP
16ul TEMED
染色前必须固定：
先用ddH2O洗胶,然后用50ml 新鲜配的5%戊二醛去固定30min,再用水洗3X5min,再染色.固定后,小分子蛋白会染的比较好.
如果连Marker正常分子量大小的条带都看不到的话,你也得考虑染液的问题,因为即使没有固定,正常分子量大小的条带也应该能够染出来的.

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tricine-sds-page 跑后转膜,怎么小于10k没有条带了答：western blot 印迹方法，又称为免疫印记，是将获得的蛋白质样品通过sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳，对不同分子量的蛋白质进行分离，并通过转移电泳将凝胶上分离到的蛋白质转印至固相支持物（nc膜或pvdf 膜）上

Western blot 的目的条带较为弥散是怎么回事答：1. 电泳凝胶浓度选择不当。2. 低于10Kd的小分子蛋白质要用Tricine胶。3. 靠近前沿的电泳带分辨率不佳。根据分子量与凝胶孔径的关系，选择适当浓度的凝胶。4. 蛋白质样品水解。注意除去蛋白质样品的内源性的水解酶，不要反复冻融。5. 电泳时间过长或过短。溴酚蓝达到分离胶的底部即应该关闭电泳电源。

sdsmaker条带不一样是缓冲液种类还是胶本身答：缓冲液。SDS-PAGE凝胶电泳中，条带不一样可能是由于缓冲液种类或者凝胶本身的差异导致的。缓冲液种类不同可能会影响凝胶电泳的分离效果。例如，Tris-Glycine缓冲液适用于分离小分子蛋白质，而Tris-Tricine缓冲液适用于分离大分子蛋白质。此外，缓冲液的pH值、离子浓度等参数也会影响凝胶电泳的分离效果。凝胶...

为什么跑小蛋白时要用tricine胶答：10%的胶，浓度高，迁移慢一些，如果都在相同位置裁，这里看到条带，6,8%的胶，膜需要裁得更靠下缘。或者把之前裁掉的膜的下半部分再拿来做做实验试试。当然，电泳时的各种因素也会有影响，但是如果其他配置完全一样，就是胶浓度变化了的话，上述原因是需要考虑的。

266KDa的蛋白具体怎么电泳?浓缩胶和分离胶分别用多大浓度的答：200 12.5 14—100 15 14—60 浓缩胶浓度低；分离胶浓度高于浓缩胶，一般不小于5%。8KD的蛋白质可能就要用Tricine–SDS-PAGE系统，因为浓缩胶和分离胶浓度太大，电泳速度很忙，很可能引起电泳带弥散。

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