酶切片段回收不到，急急急

Question

我把一个重组的片段切下来了，效果也还好，可是怎么就是回收不到呢？以前师姐也遇到这种问题，一直的不到解决，最后还是拿出去让别人做的，我这个怎么办呢？有知道的帮帮忙,先谢了

Answer 1

将目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下放入干净的离心管中，称取重量。向胶块中加入3倍体积的溶胶液PN；50水浴10min，其间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解。将上一步所得溶液加入一个吸附柱CA2中，12000 rpm离心30s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱从新放入收集管中。向吸附柱中加入700μl含无水乙醇的漂洗液PW，12000rpm离心30s，倒掉废液，将吸附柱重新防入收集管中。向吸附柱中加入500μl漂洗液PW，12000rpm离心30秒，倒掉废液。将离心吸附柱CA2放回收集管中，12000rpm离心2min，尽量去除漂洗液。将吸附柱置于室温或50℃温箱数分钟，彻底的晾干。加入30ul无菌水保存.

Answer 2

我和楼上那位仁兄用的Protocol和试剂盒可能是一样的，效果很好。

有几个问题提醒你注意一下吧。

切胶的时候尽可能少的带有不必要的胶体，过多的胶溶在溶胶液里会影响后来与柱子的结合。

溶胶液上柱子要重复一次，这样可以保证结合效率。

最后一次漂洗后，要尽量甩干漂洗液，残留的漂洗液会影响后来的洗脱。特别是可以将吸附柱放到烘箱里烘干，因为漂洗液主要成分就是70%的乙醇，挥发性很好，烘干后，漂洗液的成分残余就很少了，之后的洗脱会有很好的效果。

洗脱液最好预热到50℃，原因我也不太清楚，但经常被人告诉要这样做，我想可能也会增加洗脱效率吧。

最后，我还想说的是，其实胶上看着带还可以，回收了之后本来就不会回收得很完全，再跑胶，条带不清楚也很正常。要是你确认回收步骤没问题，还是应该在最开始酶切的时候提高你的重组载体的量并且优化一下酶切体系，保证在胶上能看到很亮的酶切条带。