SDS -酚-氯仿法提取动物基因组DNA的抽提液怎么配制，查资料只有浓度，没有体积配比，急请高手帮忙，谢谢！

Question

所查资料：0.1mol/L EDTA，10mmol/L Tris-HCl，20ug/ml 胰RNA酶，0.5% SDS，实验过程中需加抽提液600ul，请问各自的体积怎么算，这几个组分能混合么，还是加的时候得分开加，如果混合的话能存放多久，还是需要先用现配，真心感谢！ 另外 酚应该是什么酚，是平衡酚，还是饱和酚

Answer 1

您好！
① 抽提液应该包括TE（0.1mol/L EDTA，10mmol/L Tris-HCl，pH8.0）和0.5% SDS。另外应该还有蛋白酶吧，否则无法裂解细胞。胰RNA酶可以在裂解异丙醇沉淀后再加。
② 这几个都可以配成配成母液，用之前再进行混匀，具体母液浓度一般0.5M EDTA（pH8.0），1M Tris-HCl（pH8.0），10%SDS。RNA酶10mg/ml。其中EDTA、Tris 4℃保存，SDS室温保存，酶类都是-20℃分装冻存。
③ 平衡酚就是饱和酚。

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这个抽提液每次用只用几ml就够了，能多混匀一些待用么，如果混匀的话能在多少度下放多久，还有就是请您解答一下各组分的体积加多少合适，谢谢

追答

除了酶，其他可以多混匀一些，室温放置就行。
您根据母液浓度与实际使用浓度计算一下加入体积就行，这个您应该掌握，特别是刚开始做实验的时候。

追问

使用浓度是根据使用的抽提液体积算的，对么，即600ul抽提液中EDTA的浓度为0.1mol/L,，浓度换算时，EDTA的原浓度为0.5mol/L,体积是600ul，对么

追答

600ul抽提液中EDTA的浓度为0.1mol/L，那么只需要120ul 0.5MEDTA加水成600ul。

追问

这个600ul应是0.5mol/L EDTA、10mmol/L Tris-Hcl，0.5% SDS的总体积吧，我算了一下0.5M 的EDTA需要120ul；10mM Tris-HCl 60ul, 0.5%SDS 30ul,其余补水至600ul，这样对么
另外我的胰RNA酶是固体的，需用Tris-Hcl、Nacl 配成20ug/ml的浓度，那20ug/ml胰RNA酶用时需要加多少体积，具体在哪一步加合适，我没有用到异丙醇， EDTA、 Tris-HCl、SDS如果用灭菌水配的话，配完以后还用灭菌么；问题肤浅，多谢帮助！

追答

算的对。
RNA酶最后加都行。
EDTA、 Tris-HCl可以灭菌，不灭4℃放着半年也没问题。SDS不需要。