动物细胞贴壁培养的方法有哪些

Question

如题所述

Answer 1

动物细胞贴壁培养的方法有组织块培养法和消化培养法。

贴壁细胞培养方法操作步骤 ：

1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻
片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

 实验要点及说明 ：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃制造，并经过铬酸洗液处理； 

3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；

 4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；

 5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

贴壁培养的优点：

容易更换培养液；细胞紧密黏附于固相表面，可直接倾去旧培养液，清洗后直接加入新培养液。

容易采用灌注培养，从而达到提高细胞密度的目的；因细胞固定表面，不需过滤系统。

当细胞贴壁于生长基质时，很多细胞将更有效的表达一种产品。

同一设备可采用不同的培养液/细胞的比例。

适用于所有类型细胞。

 贴壁培养的缺点：与悬浮培养法相比

扩大培养比较困难，投资大；

占地面积大；

不能有效监测细胞的生长；

Answer 2

原代培养有两种
组织块培养法：
1）将上述剪好的小块放入15ml离心管中用10ml的Hanks洗液强有力的反复吹打,1000转离 心1分钟,弃去上清,重复一次.
2）用习惯将组织块放入25cm2 培养瓶中,竖起培养瓶,加入1-2ml培养液,培养箱中将培养瓶底朝上,放置2-4小时,小心将培养瓶方正,继续培养.
3）培养3-4小时后缓慢取出培养瓶,加5ml培养液,继续培养.
4）三天后小心取出观察,搜集漂浮组织块,置入离心管中,400转离心3分钟,弃去三分之二 上清,补加5ml培养液,移入25cm2 培养瓶中继续培养.
消化培养法：
1）将上述剪好的小块放入15ml离心管中,加入5-10ml的IV胶原酶消化液,放入37℃水浴中不断震荡,联系观察一小时,直至组织块弥散开为止,每隔30分钟收集消化液.
2）400转离心4分钟,收集细胞沉淀,用Hanks洗液冲洗,并重复一次.
3）将收集的细胞沉淀,用培养液重悬,置于4°冰箱,直至消化全部结束.
4）将细胞悬液通过250目不锈钢钢筛,将滤液置于25cm2 培养瓶中,放入培养箱培养.本回答被提问者采纳