细胞冻存的具体过程

Question

如题所述

Answer 1

细胞冻存的具体过程：

1、选择活力好，密度约80%的细胞，此时细胞处于对数生长期，比较适合冻存。细胞冻存依旧分为贴壁细胞冻存和悬浮细胞冻存。

2、显微镜下观察细胞状态，若细胞密度较高，培养基变黄，需要换液4h之后再进行冻存操作，细胞长满后，将培养皿中的培养基用枪小心的吸去。再用PBS冲洗一到两次，尽量吸干净润洗的PBS，加入胰酶消化细胞，消化一定要注意控制胰酶作用时间。

3、消化完成后加6-8ML*培养基终止消化，混匀细胞，收集细胞悬液。对于消化这步，建议按照下述操作：胰酶首先复温到室温后加入细胞，放入37℃培养箱，然后每隔30秒，吹打下细胞。

4、900-1000rpm离心3分钟，弃上清,加入配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml，在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者，装有细胞的冻存管放入-4℃冰箱10分钟，然后放入-80℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。

5、24小时后取出一只冻存管复苏，检查活性及是否污染。如果能够吹打散细胞，说明细胞消化完成可以终止消化，之后混匀细胞时尽量轻柔，不要产生过多气泡。如果30秒不能分散，则再等30秒重复操作。

细胞的背景知识：

细胞培养的传代及日常维持过程中，在培养器具、培养液及各种准备工作方面都需大量的耗费，而且细胞一旦离开活体开始原代培养，它的各种生物特性都将逐渐发生变化并随着传代次数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。

因此及时进行细胞冻存十分必要。细胞冷冻储存在-70℃冰箱中可以保存一年之久；细胞储存在液氮中，温度达-196℃，理论上储存时间是无限的。