该细胞系来自可移植的雄性大鼠的肾上腺嗜铬细胞瘤;表达神经生长因子(NGF)受体,NGF可诱导该细胞产生可逆性的神经表型。该细胞可产生儿茶酚胺、多巴胺和去甲肾上腺素,但不合成肾上腺素。
细胞别称:PC 12; PC12
细胞来源:肾上腺嗜铬细胞瘤
细胞形态:多形态细胞样
生长特性:疏松贴壁,有多细胞聚集体
包装规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
倍增时间:2~3天
传代比例:1:3
保藏机构:CCTCC; GDC0006
培养体系:RPMI-1640(TM175)+10%HS(TS600)+5%FBS(TS500)
培养条件:气相:空气,95%;CO2,5%;温度:37℃
冻存条件:完全培养基+8%DMSO +20%FBS(TS500),液氮保存
该细胞轻微贴壁和悬浮培养的细胞,传代可以参考以下方法:
收集:将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中。
加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL)置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min,弃去上清,补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
配置细胞冻存液,放置 4℃预冷;
将培养瓶内细胞悬液用吸管完全吸出,转移到无菌离心管中,取细胞悬液计数;
1000rpm 离心 10min,弃去上清,加适量细胞冻存液,重悬细胞;
将细胞悬液分装到1ml冻存管中; ( 4℃预冷 30min)
将冻存管转入程序降温盒中(程序降温盒需提前在 4℃预冷),于-80℃过夜;
从程序降温盒中取出冻存管,快速转移到液氮中保存。