1、获取目的基因? 2、形成重组DNA分子? 3、将重组DNA分子导入受体细胞? 4、筛选含有目的基因的受体细胞? 5、目的基因表达工具：限制性核酸内切酶（切割磷酸二酯键）、DNA连接酶（链接磷酸二酯键）、载体（主? 要为质粒、原核小型环状DNA）获取目的基因：若序列已知则用PCR扩增或化学方法合成：若序列未知则建立基因文库，从中获取形成重组DNA分子：用同一限制性核酸内切酶切割质粒和目的基因形成相同的粘性末端，再用目的基因链接将重组DNA分子导入受体细胞：若受体为动物用显微注射法：若受体为植物用农杆菌转化法或花粉管法：若受体为微生物用氯化钙处理法（增加细胞壁通透性）筛选含有目的基因的受体细胞：利用载体上的标记基因进行筛选目的基因表达：个体水平上的性状，分子水平上的相应蛋白质、mRNA
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