你得分析一下为什么柱压高。
有的色谱柱出厂的时候柱压就很高,比如同样是迪马的色谱柱,一代柱压力低,二代柱压力高。虽然填料差不多,不过二代柱是国内填充的。可能工艺上不好。或者pH耐受范围广的,压力可能会高。这种情况不能改变。只能更换色谱柱。
如果是压力不高,而是之后实验过程导致,那也有很多可能。反正就是堵住了。因为不通所以压力高,处理的话通开了就好。
a.气泡堵住了。这种情况不但柱压高,而且波动大。用纯的甲醇或者乙腈低流速冲洗,色谱柱出口朝上,尽量让气泡从上面流出来
b.盐堵住了。这个只能是10-15%的甲醇水冲洗,把柱温加到35℃。看看能不能把盐溶出来
c.强保留物质。这个几乎没办法冲洗,每一根就柱子的柱前都不是填料本身的白色,而是黄色的。这个就是……样品溶液中的强保留物质。所以样品进入仪器前一定要过滤!拿甲醇反冲冲冲看吧,运气好可以冲掉。
d.微生物。一般老实验员不会犯这种错误,纯水或者纯盐的流动相,即便过滤了,最多放置一天。再久就会长细菌了。这个你自己看看流动相的瓶子,把里面的流动相倒出来,摸摸瓶壁如果滑滑的,那就是长细菌了。这个挺麻烦的,先用纯甲醇冲洗,然后用DMF低流速冲洗,据说可以冲掉70%的细菌和细菌尸体。
目前就想到这些,再多了只能你结合试验情况自己分析了。
液相色谱柱在工作的时候常见的就是色谱柱柱子压力增高,如果液相色谱柱是在工作使用的过程中缓慢增加的话,那么属于正常现象,如果色谱柱柱压是突然一下子就增加了,我们先排除管路堵塞或者压力传感器故障除外,可能会是下面几个原因:
1、液相色谱柱头的过滤筛板堵塞或污染;
2、液相色谱柱头的填料被样品污染;
3、流动相PH值过大或过小使固定相结构破坏或溶解;
4、液相色谱柱内缓冲液中的盐遇到高浓度的甲醇或其他有机溶剂,形成结晶析出。
针对以上四大原因,我们提出了以下四大解决方案:
1、如确定是液相色谱柱头的过滤筛板被污染,可以将液相色谱柱反方向用甲醇冲洗至正常压力,或者卸下液相色谱柱头,将其放在10%的稀硝酸内超声清洗10分钟,后再用纯水超声10分钟,重新装入液相色谱柱。
2、如确定液相色谱柱头的填料被污染,将柱头螺丝卸下,挖出柱内前段被污染的填料,用相同的柱填料重新填入,仔细修复后,重新安装上柱头螺丝。
3、如果因PH值使用不当,很难恢复。
4、如确定定是盐结晶,用10%的甲醇/水冲洗液相色谱柱使柱内盐全部溶解,再换高浓度甲醇。
液相色谱柱蛀牙高的原因和解决方法