蛋白质甲基化检测常用方法？

Question

如题所述

Answer 1

蛋白质甲基化检测是研究蛋白质表观遗传修饰的一种重要方法之一。以下是常用的蛋白质甲基化检测方法：

1、免疫印迹（Western blotting）：使用特异性抗体结合甲基化蛋白质，在蛋白质电泳分离后进行检测。可以通过对不同样品的比较来定量甲基化水平。

2、免疫组织化学（IHC）：在组织切片上使用特异性抗体标记甲基化蛋白质，通过显色反应来可视化甲基化的位置和强度。

3、免疫共沉淀（Co-IP）：利用特异性抗体将甲基化蛋白质与其互作的蛋白质一起结合，然后使用Western blotting等方法检测共沉淀的蛋白质。

4、质谱法（MS）：通过质谱分析技术对蛋白质进行定性和定量检测。可以通过氨基酸残基的质量变化来判断是否发生了甲基化修饰。

5、甲基化特异性PCR（MSP）：利用特异性引物扩增甲基化或非甲基化的DNA序列，结合凝胶电泳分析来判断目标基因是否发生了甲基化。

蛋白质甲基化

这些方法可以单独或联合使用，根据实验目的和样品类型的不同选择合适的方法进行蛋白质甲基化检测。

Answer 2

蛋白质甲基化是一种重要的翻译后修饰过程，涉及将甲基转移酶（如蛋白质精氨酸甲基转移酶和蛋白质赖氨酸甲基转移酶）通过将甲基基团（来自S-腺苷甲硫氨酸）转移至蛋白质的氨基酸残基（主要是精氨酸或赖氨酸）上，从而影响蛋白质的功能和活性。检测蛋白质的甲基化状态是生物学研究和疾病诊断中的关键步骤。以下是几种常用的蛋白质甲基化检测方法：
1、西方印迹（Western Blot）分析
这是一种常用的方法，用于检测特定蛋白质在样品中的存在和量。使用针对甲基化位点的特异性抗体，可以通过这种方法检测蛋白质的甲基化状态。
2、质谱分析
质谱分析是一种强大的工具，能够鉴定蛋白质甲基化的确切位置。通过与计算机数据库中的已知质谱图谱比较，可以鉴定出蛋白质样品中的甲基化位点。
3、免疫共沉淀（Immunoprecipitation, IP）和色谱技术
通过使用特异性抗体结合目标蛋白，然后将蛋白-抗体复合物从混合物中分离出来，可以富集甲基化蛋白。进一步可以通过液相色谱和气相色谱分析这些蛋白。
4、酶联免疫吸附测定（Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）
这是一种用于检测特定抗原（例如甲基化蛋白）存在和量的高通量方法。特异性抗体用于检测和定量甲基化程度。
5、荧光共振能量转移（FRET）
通过使用荧光标记的抗体，FRET可以在活细胞中实时监测蛋白质的甲基化状态。