在蛋白质偶联的时候都应该注意什么

Question

如题所述

Answer 1

关键需要看偶联的蛋白的特性。需要根据蛋白特性来选择不同的偶联方法，不同的偶联方法针对的功能基团不同，位置当然更加不固定了，活化剂种类更多。
人工抗原合成常用的载体：
载体表面应首先应具有化学活性基团，这些基团可以直接与抗生素(antibiotic)或农药分子偶联，这是化学偶联制备抗原的前提；其次，载体应具备一定的容量，可以偶联足够的分子；载体还应该是惰性的，不应干扰偶联分子的功能；而且载体应具有足够的稳定性，且应该是廉价易得的。
常用来作为合成人工抗原的载体蛋白质有牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、钥孔血蓝蛋白(KLH)、人血清白蛋白(HSA)及人工合成的多聚赖氨酸(PLL)等。这些蛋白质分子中的α和ε-氨基（等电点8和10）、苯酚基、巯基（等电点为9）、咪唑基（等电点为7）、羧基（等电点2～4，大部分来自天冬氨酸或谷氨酸的β-和γ-羧基）等在等电点pH条件下，一部分成为质子，另一部分未质子化的亲核基团则具有反应活性，可与半抗原中的对应基团结合。当然，这些基团的反应性也取决于蛋白质各种氨基酸残基的微环境。牛血清白蛋白（BSA）和人血清白蛋白（HAS）分子中含有大量的赖氨酸，故有许多自由氨基存在，且在不同pH和离子强度下能保持较大的溶解度。此外，这些蛋白质在用有机溶剂（如吡啶、二甲基甲酰胺）溶解时，其活性基团仍呈可溶状态，因此，这两种蛋白质是最常用的载体蛋白质。近年来，有研究报道用人工合成的多聚肽(最常用的是多聚赖氨酸)作载体，表现出能增加半抗原的免疫原性，从而使产生征对半抗原的特异性抗体可能性增加，被广泛应用。

Answer 2

蛋白质偶联至NHS磁珠有很多种情况
根据具体偶联的蛋白的特性可以选择不同的偶联方法，不同的偶联方法针对的功能基团不同，位置也不固定，活化剂种类也有很多
一般需要注意的就是NHS磁珠的活化，活化彻底后才能偶联完全
然后就是合适的偶联比例，过量的蛋白对于偶联完全没有帮助
偶联之后的封闭也很重要，选择合适的封闭缓冲液才能将蛋白牢固的偶联在磁珠上本回答被提问者和网友采纳