火腿肠中亚硝酸盐含量的测定

Question

如题所述

Answer 1

火腿肠中亚硝酸盐含量的测定试验方法包括以下几个步骤：
一、测定原理：
样品在去蛋白、脂肪后，于弱酸性环境中，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，生成重氮盐。该重氮盐随后与偶合试剂（盐酸萘乙二胺）偶合，形成紫红色染料。染料颜色的深浅与亚硝酸根的含量成正比。该染料的最大吸收波长为538nm，通过测定吸光度，可以与标准比较以定量。
二、实训操作：
1. 仪器设备：
- 小型绞肉机或组织捣碎机或研钵
- 可见分光光度计
- 天平（感量为0.1mg和1mg）
- 50ml烧杯
- 500ml容量瓶
- 小玻棒
- 比色管
- 比色架
2. 试剂：
- 亚铁氰化钾溶液（106g/L）
- 乙酸锌溶液（220g/L）
- 饱和硼砂溶液（50g/L）
- 氨缓冲溶液（pH9.6—9.7）
- 缓冲液的稀释液
- 盐酸（0.1mol/L）
- 对氨基苯磺酸溶液（4g/L）
- 盐酸萘乙二胺溶液（2g/L）
- 亚硝酸钠标准溶液（200µg/mL）
- 亚硝酸钠标准使用液（5.0µg/mL）
3. 样品预处理：
- 提取：取0.5g均质火腿肠样品，加入12.5ml饱和硼砂液，搅拌均匀后，加入约300ml约70℃热水，将试样洗入500mL容量瓶，沸水浴加热15min，冷水冷却至室温。
- 提取液净化：向上述提取液中加入亚铁氰化钾和乙酸锌各5mL，定容后放置0.5h，撇去脂肪层，过滤（弃去不溶物），弃去初滤液约30mL，正衡滤液待测。
4. 成分分析：
- 标准曲线绘制：取10个50mL比色管，吸取40mL样品处理液至其中一个比色管中，另吸取0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.50、2.00、2.50mL亚硝酸钠标准使用液，分别置于其余的比色管中。在所有比色管中加入2mL 0.4%对氨基苯磺酸溶液混匀，静置3-5min，加入1mL 0.2%盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀后静置15min。用2cm比色杯，以零管调节零点，于波长538nm处测吸光度A，绘制标准曲线，同时做试剂空白。
- 样品测定：选择合适的稀释倍数，吸取40mL上述滤液于50mL容量瓶中，按绘制标准曲线的步骤测量吸光度A，记录，从标准曲线查出稀释样品中的亚硝酸钠的量。