随机取灭过菌的培养基，标明记号和日期，置25℃下培养3～7天，检查菌落种类、数量和出现部位。如果培养基表面无任何变化，则表明灭菌效果良好，可接种应用；若个别培养基出现杂菌菌落，可能由于摆放过紧，导致蒸汽不畅，或锅的结构不太合理等原因所致；如果是大部分或全部培养基上出现了杂菌菌落，可能由于温度或灭菌时间不够，要提高灭菌压力或延长灭菌时间。
接种室或接种箱在接种前需要消毒灭菌，其效果受药剂的有效期、浓度和时间长短等因素的影响，因此要定期检测消毒效果，一般通过平板法。斜面法检查有无杂菌菌落出现，以便及时更换药剂，改进消毒措施和操作方法。
（1）平板法
用肉汤琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂等常规培养基，分别倒入培养皿中形成平板，每种两皿，均放入接种室或接种箱。检验时，按无菌操作要求各将其中一个培养皿的盖子打开，经过5～30分钟预定时间再盖好；另外一个不开盖为对照。然后一起都放在30℃培养条件下培养48小时后检查有无菌落出现。
（2）斜面法
将以上的常规培养基灌入试管中制成斜面，各取两支斜面试管，按无菌操作各将其中一支棉塞打开，把棉塞放入灭菌的培养皿中，经过预定时间再将棉塞塞好，同时一起放入30℃培养箱中培养，48小时检查。根据是否长菌落和菌落的数量、形体，来判断空气污染的程度及杂菌的种类。一般要求培养皿平板开盖5分钟不超过3个菌落；斜面开塞30分钟不长菌落。若所长的菌落超过这个数字，应考虑采取措施提高灭菌效果或改进操作方法。