作倍比稀释的方法如下:
1.一份水(比如10ul)+一份血清(10ul),混合,此处血清稀释2倍;
2.10ul水+10ul第一次稀释好的血清,混合,此处血清4倍稀释;
3.10ul水+10ul第二次稀释好的血清,混合,此处血清稀释8倍;
4.10ul水+10ul第三次稀释好的血清,混合,此处稀释16倍;
之后重复可得32倍,64倍,128倍…
样本稀释的原则
在查询背景知识,或者通过预实验,确认了样本浓度过高,需要进行稀释,就要根据以下原则,严谨操作和计算。
1、稀释倍数合理。稀释后样本测定的OD值,要求落在标准品最高值OD值的半量程内,假定标准品最高值的OD值是2.4,那么稀释后的样本,OD值接近1.2,在这个范围附近,计算的浓度值最为准确,以这个结果乘以稀释倍数,得到的样本浓度最准确。
2、稀释过程规范。特别是大倍比的稀释,最好是梯度稀释。比如样本要稀释200倍,就先稀释10倍,再在10倍稀释的基础上,再进行稀释20倍,得到200倍。
3、样本取样量不要太小。在样本充足的情况下,样本取样量不要低于5uL,越低的取样量,在混匀取样过程中,误差越大。
样本稀释容易犯的错误
1、稀释不足。稀释倍数不足时,容易导致最终结果偏小。
2、过度稀释。过度稀释时,容易导致最终结果偏大。
3、稀释不够规范,引入很多人为偏差。稀释不够规范,特别是大比例稀释时,人为偏差大大增加。