分光光度法测定时，为什么要控制吸光度？

Question

如题所述

Answer 1

吸光度A与透光率T之间的关系： 分光光度法测定时，一般要求吸光度A在0.2-0.8之间，因为当吸光度在0.187-0.824之间时，浓度的相对误差在2%以内。分光光度法：通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。它具有灵敏度高、操作简便、快速等优点，是生物化学实验中最常用的实验方法。许多物质的测定都采用分光光度法。在分光光度计中，将不同波长的光连续地照射到一定浓度的样品溶液时，便可得到与不同波长相对应的吸收强度。原理：朗伯一比尔（Lambert - Beer）定律是分光光度法的基本原理。当一束单色光通过一均匀的溶液时，一部分被吸收，一部分透过，设入射光的强度为I0，透射光强度为I，则I/I0为透光度，用T表示。 1.当溶液的液层厚度不变时，溶液的浓度越大，对光的吸收程度越大，则透光度越小。即：-lgT=a*c（式中a为吸光系数，c为浓度）当溶液浓度不变时，溶液的液层厚度越大，对光的吸收程度越大，则透光度越小。即：- lgT=a*b（b为液层厚度）将以上两式合并可用下式表示：lgT=a*b*c 2.研究表明：溶液对光的吸收程度即吸光度（A）又称消光度（E）或光密度（OD）与透光度（T）呈负对数关系，即：A=-lgT 因此A=a*b*c，即朗伯一比尔定律，其意义为：当一束单色光通过一均匀溶液时，溶液对单色光的吸收程度与溶液浓度和液层厚度的乘积呈正比。