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用于与载体连接的pcr酶切产物是如何纯化的 、、
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第1个回答 2022-05-23
跑胶后找到目的片段,切胶回收,纯化的传统法就是将PCR产物加入2倍体积的乙醇-20度沉淀过夜后低速短暂离心(如 3000rpm离心1~2min),弃掉上清,然后用70%乙醇洗涤一次后,弃掉乙醇,放干后再用无菌水或者TE溶解.当然这种方法对PCR产物纯化后回收率是很低的,你需要多做几管PCR,然后一起纯化回收.
但是现在实验室一般都是用PCR产物纯化试剂盒,回收纯化的效果要好得多.
相似回答
...注意我想知道的是
用于
测序
的pcr产物酶切纯化,
不是用于克隆的酶切...
答:
这种方法是采用虾碱酶(SAP,Shrimp Alkaline Phosphatase)和外切酶I的混合溶液
,来消化pcr扩增体系中多余的dNTPs和引物,以便后面的测序。一般使用的终浓度为1ul混合溶液中,含有虾碱酶0.6单位,外切酶I1.2个单位,这个比例也可以自己通过试验来调整。一般是1ulpcr产物加2ul溶液。37度孵育15分钟,即可...
PCR产物酶切
后需要
纯化,
我们是用的试剂盒,但是试剂盒
纯化的
原理是什么呢...
答:
PCR产物酶切
后跑胶,不是有你需要的条带么,你看大小切出你需要的条带,试剂盒只是把你切出的胶质里的DNA回收回来 柱子黏附的是DNA 不懂可以追问
如何
对
PCR
扩增的
产物
进行
酶切
?
答:
Fermentas公司的研究表明,限制性内切酶在 PCR扩增体系中仍然有部分活性,可以通过稀释(3倍以上)扩增混合液,适当提高酶量和反映时间,进行
酶切
。个人认为需要对
PCR产物
进行酶切分析通常是为了或基因表 型分析,由于Taq,Pfu等高温聚合酶在酶切温度(37度或更高)下,仍然保持一定的活性,高温聚合酶所...
双
酶切的连接
反应
答:
所以,
PCR产物和双酶切产物的纯化均可应用柱式纯化
。我用的是TAKARA的纯化柱试剂盒酶量的问题:以TAKARA的为例,其对1单位酶的定义如下:在50 μl 反应液中,37℃温度下反应1小时,将1 μg 的λDNA完全分解的酶量定义为1个活性单位(U)。 而该酶浓度约为15单位/微升,在除外酶降解的 因素外,...
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