求助毕赤酵母菌落PCR方法

如题所述

你是想像细菌那样通过菌液PCR来验证你的目的片段是否转入酵母菌吗?我觉得还是用你摇的菌液,试剂盒提取酵母菌的DNA后,再取0.5-1ul做验证,这样成功几率会比较高。因为菌液PCR的话,模板的量是无法控制的。模板浓度太大的话,也会导致无法获得阳性条带。
还有一种方法是实验室其他人做过的,你可以参考一下:
1.用灭菌牙签挑单克隆到10ul无菌去水中;
2.加5ul(5u /ul)的溶细胞酶(推荐SIGMA的);
3.37度水浴半小时;
4.-80度静置15分钟;
5.沸水中煮沸5分钟;
6.12000RPM离心5分钟;
7.取上清0.5-1ul到25ulPCR反应体系
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