求助Hela细胞培养

如题所述

Hela细胞是人宫颈癌细胞株,也是大家认为比较好养的细胞株的一种。我一般都是用10%1640,0.25%胰酶消化,时间大概是3——5分钟,这些你都可以自己摸索,在镜下观察或者用滴管吹大一下,做几次就知道了。细胞长得比较快,大概2天就可以传一次代,我一般都是一传三,最多3天传一次。细胞长满了就可以传了,(转载,仅供参考)
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第1个回答  2023-03-13

HeLa 人宫颈癌细胞 信息及培养方法如下

HeLa是第一个来自人体组织经连续培养获得的非整倍体上皮样细胞系,它由GeyGO等在1951年从31岁女性黑人的宫颈癌组织建立。经原始组织切片重新观察,Jones等将其诊断为腺癌。已知该细胞系含有人乳头状瘤病毒HPV18序列,需在2级生物安全防护台操作。该细胞角蛋白阳性,p53表达量较低,但表达正常水平的pRB(视网膜母细胞瘤抑制因子)。

基本信息

    细胞别称:HELA;He-La; HeLa-CCL2; Henrietta Lacks cells; Helacyton gartleri

    细胞来源:宫颈

    细胞形态:上皮细胞样

    生长特性:贴壁生长

    安全等级:BSL2

    包装规格:T25瓶或者1mL冻存管包装

    倍增时间:2~3天

    传代比例:1:3

    保藏机构:ATCC; CCL-2;ATCC; CRM-CCL-2;CCTCC; GDC0009;JCRB; JCRB9004;

培养保存

    培养体系:MEM(TM205) +10%FBS(TS500)

    培养条件:气相:空气,95%;CO2,5%;温度:37℃

    冻存条件:基础培养基+10%DMSO +20%FBS(TS500),液氮保存

传代步骤

如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

    弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次;

    加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化;

    按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀;

    收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1:2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中,建议冻存一支备用,后续传代根据实际情况按1:2到1:4的比例进行。

冻存步骤

    细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入1ml含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数;

    4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和DMSO,轻轻混匀,DMSO终浓度为10%,细胞密度不低于1x10(6)/ml,每支冻存管冻存1ml细胞悬液,注意冻存管做好标识;

    将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

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