分离和提纯蛋白质的方法有盐析法、离子交换法、凝胶色谱法。
1、盐析法：盐析法是一种常用的蛋白质分离方法，原理是向蛋白质溶液中加入高浓度的盐溶液，使蛋白质的溶解度降低，从而从溶液中析出。常用的盐析剂有硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等。盐析法操作简单，但需要控制好盐浓度和温度，否则可能会对蛋白质产生不可逆的变性。
2、离子交换法：离子交换法是一种利用离子交换剂分离蛋白质的方法。离子交换剂是一种不溶于水的物质，表面带有电荷，可以与带电的蛋白质分子发生交换反应。通过改变离子浓度和pH值，可以控制蛋白质的吸附和释放，从而实现蛋白质的分离。离子交换法具有高选择性和高纯度，但需要控制好离子浓度和pH值，操作相对复杂。
3、凝胶色谱法：凝胶色谱法是一种利用凝胶的分子筛作用分离蛋白质的方法。凝胶是一种不溶于水的物质，具有三维网络结构，可以分离不同大小的蛋白质分子。通过将样品溶液通过凝胶色谱柱，不同大小的蛋白质分子会根据其大小被分离成不同的组分。凝胶色谱法具有高分辨率和高纯度，但需要控制好流速和pH值，操作相对复杂。
分离和提纯蛋白质的注意事项：
1、防止蛋白质变性：蛋白质在某些条件下会发生变性，如高温、强酸、强碱等。在分离和提纯蛋白质的过程中，应避免使用这些条件，以保持蛋白质的生物活性。剧烈的搅拌、离心等操作也可能会使蛋白质变性，因此需要控制好操作条件。
2、去除杂质：分离和提纯蛋白质的目标是获得高纯度的蛋白质样品。去除杂质是分离和提纯过程中的重要环节。可以通过加入适量的盐析剂、有机溶剂等方法去除杂质。还可以采用色谱技术、电泳技术等手段进一步纯化蛋白质样品。
3、避免样品污染：在分离和提纯蛋白质的过程中，应避免样品污染。样品的污染可能来自于试剂、设备、环境等多个方面。需要选择高质量的试剂和设备，并进行严格的消毒和灭菌操作。还需要注重实验室的卫生和安全，避免交叉污染。