氨苄抗性筛选的单菌落在含氨苄的液体培养基里为啥不长

Question

求助哦，我在含氨苄的LB平板上长的单菌落，为啥挑到含氨苄的LB液体培养基里就不长了呢，固体和液体培养基氨苄的浓度都是50ug/ul,有谁知道原因lo

补充，菌落是DH5a大肠杆菌，用的是PMD-18 simple 的载体，感受态细胞是自己制的

Answer 1

我也遇到过这个问题，有两种情况。

1、如果是出现在转化后，则要看转化后长出菌落的多少。若这个平板上密密麻麻都是菌落，有可能是氨苄失效或部分失效（毕竟要趁培养基未凝的时候倒平板，可能加入氨苄时温度高了点；又或者是平板放存时间过久）。若平板上只是零星长了几个菌落，则可以考虑是杂菌或活性不好的转化菌。个人认为固体氨苄培养基的环境比液体氨苄培养基优越的多，这也是为什么长时间冻存的菌会先划平板活化一下的原因。
此时建议重新倒平板，或重新做连接转化。

2、我还遇到过筛选出来的目的菌在冰箱冻存时间过久，复活时在平板上生长，但在液体培养基中繁殖极度缓慢，基本不长的情况。
后来，我用保存的质粒重新转入了感受态细胞，解决了这个问题。

希望以上对你有所帮助。我觉得实验中，找原因固然关键，但有时候重新做一次实验更能解决问题。因为，很多不成功的结果是由偶发因素导致的。