检验一种蛋白质在细胞中的定位实验方法及步骤 哪位博学的好心人帮忙解答一下,尽量详细,谢谢了。。。

如题所述

步骤
蛋白质原位杂交
步骤
1、提取纯化该蛋白(提取及纯化蛋白质的方法生化上有讲到)
2、制取该蛋白的特异性抗体
(将提取的蛋白质注入小鼠体内,使它产生免疫反应,产生特异性抗体,然后提取小鼠血清,血清中含有相应抗体)
3、将抗体与荧光分子(如GFP),辣根过氧化物酶(HRP)等标记物连接
4、标记抗体与组织切片标本孵育,抗体与细胞中相应抗原发生特异性结合,结合部位被标记物显示
5、在显微镜下观察到该肽或蛋白质的分布(抗体分子如与荧光分子连接,就在荧光显微镜下观察;如与HRP连接,则在光镜和电镜下进行观察)
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