薄层色谱法的操作技术及要点主要包括选择薄层板、点样、展开、显色、检视与记录等方面。
1、选择薄层板
薄层板是指将固定相涂布在玻璃板、塑料板或铝箔上的载体。常用的固定相有硅胶、氧化铝、微晶纤维素等，根据样品的性质和分离目的选择合适的固定相。薄层板的厚度应均匀，表面平整，无花斑、水印等缺陷。
2、点样
点样是指将待测样品溶液以微量毛细管或微量注射器等工具点在薄层板上的过程。点样时应注意：首先，点样位置应距离薄层板底端1～2.5cm，距离边缘至少1cm，以防止边缘效应。其次，点样直径应小于5mm，一般为2～4mm，以防止斑点扩散或重叠。
再者，点样间距应为1～1.5cm，以防止斑点互相干扰。最后，点样量应适当，过多会导致斑点扩散或重叠，过少会导致检出困难。点样后应待溶剂挥发干燥后再进行展开。
3、展开
展开是指将点了样的薄层板放入含有流动相的展开室中，使流动相沿着固定相上升，带动样品中的各组分随之移动并分离的过程。展开时应注意：首先，展开室应预饱和，即在展开前将展开剂放入展开室中，并用滤纸贴在室壁上，使其达到饱和状态，以保证展开剂的稳定性和重现性。
其次，展开剂应根据样品的性质和分离目的选择合适的溶剂或溶剂混合物，并且临用时新配为宜，避免变质或污染。再者，展开距离应适当，一般为8～15cm，不宜过长或过短。最后，展开后应及时取出薄层板，并在适当位置标记出溶剂前沿线，然后使溶剂挥发干燥后再进行检视或显色。
4、显色
显色是指将展开后的薄层板用紫外光灯照射或用显色剂喷洒，使样品中的各组分在薄层板上形成可见的斑点的过程。显色时应注意：首先，对于有色组分，可以直接在可见光下检视。其次，对于无色组分，可以用紫外光灯照射，利用各组分对紫外光的吸收或荧光特性进行检视。
再者，对于无色且无荧光的组分，可以用显色剂喷洒，利用各组分与显色剂的化学反应或物理吸附产生不同颜色的斑点进行检视。最后，显色剂应根据样品的性质和检测目的选择合适的种类，并且喷洒时要均匀、适量，避免过量或不均匀影响检测效果。
5、检视与记录
检视与记录是指对显色后的薄层板进行观察、测量、比较和记录的过程。检视与记录时应注意：首先，对于有色或荧光的斑点，可以直接在可见光或紫外光下观察其颜色、形状、大小等特征。其次，对于无色且无荧光的斑点，可以在显色后用可见光观察其颜色、形状、大小等特征。
再者，对于每个斑点，应测量其比移值（Rf值），即斑点中心至原点距离与溶剂前沿至原点距离的比值。Rf值是反映样品中各组分在固定相和流动相中相对移动能力的指标，对每种化合物来说，在一定条件下是一个恒定值。