å®éªåç
DNA/RNAå¨260nmå¤ææ大çå¸æ¶å³°ï¼èç½è´¨å¨280nmå¤ææ大çå¸æ¶å³°ï¼çåå°åååéä¸å¨230nmå¤ãå æ¤ï¼å¯ä»¥ç¨260nmæ³¢é¿è¿è¡åå
æµå®DNAæµåº¦ï¼
ODå¼ä¸º1ç¸å½äºå¤§çº¦50μg/mlåé¾DNAãå¦ç¨25pxå
å¾ï¼ç¨ H2Oç¨éDNA/RNAæ ·ånå并以H2O为空ç½å¯¹ç
§ï¼æ ¹æ®æ¤æ¶è¯»åºçOD260å¼å³å¯è®¡ç®åºæ ·åç¨éåçæµåº¦ï¼
DNAï¼ug/mlï¼=50ÃOD260读æ°Ãç¨éåæ°ã
RNAï¼ug/mlï¼=40ÃOD260读æ°Ãç¨éåæ°ã
DNA/RNA纯åçOD260/OD280为1.8æ2.0ï¼æ
æ ¹æ®OD260/OD280çå¼å¯ä»¥ä¼°è®¡DNAç纯度ãè¥æ¯å¼è¾é«è¯´æå«æRNAï¼æ¯å¼è¾ä½è¯´æææ®ä½èç½è´¨åå¨ãOD230/OD260çæ¯å¼åºå¨0.4-0.5ä¹é´ï¼è¥æ¯å¼è¾é«è¯´æææ®ä½ççåå¨.æ¬å®éªå®¤æºå¨æ¾ç¤ºæ¯OD260\OD230ï¼åæ¯å¼åºå¨2-2.5ä¹é´ï¼åå°å说æææ®ä½çå©ä½ã
å®éªæ¥éª¤
1. å°å¶å¤çDNAæ¬æµ®æº¶è§£äº
TEç¼å²æ¶²ä¸[pH8.O, 1Ommo1/LçTrisç¼å²æ¶²,å
å«ã1mmol/L EDTAã]ææ¬æµ®æº¶è§£å¨çèæ°´ä¸(ä¾æ®DNAå«éå æ°´)ã
2. ç¨å¯æ«æç
ç´«å¤åå
å
度计æµå®å¶å¤çDNA/RNAçç´«å¤å¸æ¶æ²çº¿ï¼æµå®OD260åOD280ï¼å¹¶è®¡ç®æ¯å¼ï¼OD260/OD280ï¼çº¯DNAçæ¤æ¯å¼çº¦ä¸º1.8ï½2.0ã纯RNAçæ¤æ¯å¼çº¦ä¸ºå¤§äº2.0ã
3. æ ¹æ®ï¼æ¯æ¯«å1å¾®å
ç纯DNAçOD260å¼= 0.020ï¼è®¡ç®æå¾DNAç纯度ï¼
æ¯æ¯«å1å¾®å
ç纯RNAçOD260å¼= 0.025ï¼è®¡ç®æå¾RNAç纯度ï¼
并讨论纯度è¾ä½çåå å解å³åæ³ã
260ã320ã230ã280nmä¸ç
å¸å
度åå«ä»£è¡¨äº
æ ¸é
¸ãèæ¯ï¼æº¶æ¶²æµæµåº¦ï¼ãçæµåº¦åèç½çææºç©çå¼ãä¸è¬çï¼åªçOD260/OD280ï¼Ratioï¼Rï¼ã
DNA: OD260/OD280æ¯å¼åºæ¥è¿1.80ï¼è¥Rå¼å¤§äº1.8ã说æåå¨RNAï¼å¯éæ°ç¨RNaseAå¤ç,é
:氯仿:
å¼æé(23:24:1)æ½æãè¥Rå¼å°äº1.8ï¼å说ææèç½è´¨çæè´¨åå¨ï¼éåç¨èç½é
¶KãSDSåç¼ã氯仿ãå¼æééæ°å¯¹DNAè¿è¡çº¯åï¼ä¹å¯å å
¥1/8ä½ç§¯ç3M NaAc(pH5.2)ä¸å·
ä¹éä¸åä¿ä½¿DNAæ²æ·æåºã
RNA: OD260/OD280æ¯å¼å¨1.8-2.0æ¶ï¼è®¤ä¸ºRNAä¸èç½æè
æ¶å
¶ä»ææºç©ç污ææ¯å¯ä»¥å®¹å¿çï¼ä¸è¿è¦æ³¨æï¼å½ä½ ç¨Trisä½ä¸ºç¼å²æ¶²æ£æµå¸å
度æ¶ï¼Rå¼å¯è½ä¼å¤§äº2ï¼ä¸è¬åºè¯¥æ¯<2.2çï¼ãå½R<1.8æ¶ï¼æº¶æ¶²ä¸èç½æè
æ¶å
¶ä»ææºç©ç污ææ¯è¾ææ¾ï¼ä½ å¯ä»¥æ ¹æ®èªå·±çéè¦å³å®è¿ä»½RNAçå½è¿ãå½R>2.2æ¶ï¼è¯´æRNAå·²ç»æ°´è§£æåæ ¸é
¸äºã
注æäºé¡¹ï¼
1. æç¨ååéè¦é«æ¸©é«åï¼ä»¥çæ´»æ®ä½çDNAé
¶/
RNAé
¶ã
2. ææè¯ååç¨é«åçèåè¸æ°´é
å¶ï¼RNAåç¨DEPCå¤ççæ°´ã
3. ç¨å¤§å£æ»´ç®¡æå¸å¤´æä½ï¼ä»¥å°½éåå°ææDNAçå¯è½æ§ã