Tris- HCl缓冲液的配制方法?

如题所述

要配制20 mM/L的Tris-HCl缓冲液,pH为7.6,需要以下试剂:

    Tris base(摩尔质量121.14 g/mol)

    HCl(浓度为37%,重量/重量)

    去离子水

    配制步骤如下:

    1.计算需要的Tris base质量(精确到0.01 g)。20 mM/L的Tris-HCl缓冲液需要0.02 mol/L Tris base。根据摩尔浓度来计算,每升液体中需要0.002414克Tris base [(0.02 mol/L) × (121.14 g/mol) = 2.414 g/L]。

    2.用去离子水充分洗涤容器,将200 mL容器置于天平上,将所需的Tris base粉末称量并加入到容器中。

    3.用去离子水冲洗烧杯,加入100 mL去离子水并加热至约60℃。

    加入计算所需的HCl量(精确到0.1 mL)。由于Tris base是弱碱,因此需要酸来调节pH值。根据pH值和酸碱平衡原理,可以计算所需的HCl体积。在这种情况下,pH值为7.6时,HCl的浓度为0.1 M左右。根据体积浓度计算,每升液体中需要10.34 mL HCl [(0.1 mol/L) × (1 L/1000 mL) × (37%酸HCl/1 mol HCl) = 0.0037 g HCl/1 mL H2O]。通过滴加的方式向溶液中加入HCl,边滴边搅拌,每滴约0.2-0.5 mL,一直加到pH值达到7.6左右。

    5.加入去离子水至刻度,彻底混合,得到20 mM/L Tris-HCl pH7.6溶液200 mL。

    注意:在配制缓冲液时,应严格遵循卫生操作规范和实验室安全措施,穿戴适当的个人防护设备。另外,浓度为37%的HCl对皮肤和黏膜有刺激性,应当小心使用,并确保在通风良好的环境下操作。

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