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3.如何用CaCl2法对大肠杆菌细胞进行转化?如果转化的基因是青霉素抗性基因,如何对转化成功的菌株
如题所述
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推荐答案 2020-07-08
先配置培养基培养大肠杆菌,培养一段时间后,向培养基加入CaCl2和载有目的基因的转化质粒继续培养一段时间后筛选已转化的菌种。
在培养基配置过程中加入青霉素
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大肠杆菌
感受态
细胞的
制备及质粒的
转化
结果
怎么
分析?
答:
材料及方法 菌种:
大肠杆菌
BL21菌株 质粒:pGEX-6P-1感受态制备方法:
CaCl2法
转化方法:热激法 CaCl2制备感受态的原理。细菌处于0·C,CaCl2的低渗溶液中
,菌细胞
膨胀成球形
,转化
混合物中的DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面,经42·C短时间热冲击处理,促使细胞吸收DNA复合物。感受...
大肠杆菌cacl2
处理
答:
1. 从37℃培养16~20 h 的新鲜平板中挑取一个单菌落(如
大肠杆菌
DH52),或1 ml 新鲜的16~20 h过夜培养物,转到一个含有100ml LB培养基的1 L 或500 ml 培养瓶中。于37℃振摇培养约2~3 h(旋转摇床200~300 r/min),每隔20~30 min测量OD600值≈0.4。2. 在无菌条件下将细菌转移到...
CaCl2法
制备
大肠杆菌
感受态
细胞
原理?
答:
cells),使外源DNA分子得以进入。目前常用的感受态细胞制备方法有CaCl2和RbCl/KCl法,RbCl/KCl法制备的感受态
细胞转化
效率较高,但
CaCl2法
简便易行,且其转化效率完全可以满足一般实验的要求,制备出的感受态细胞暂时不用时,可加入无菌甘油至总体积15%,于-70℃保存半年之久,因此CaCl2法为使用更广泛。生...
用氯化钙怎样
制备新鲜的
大肠杆菌
感受态
细胞?
答:
该方法完全适用于大多数
大肠杆菌
菌株,并且比方案I快速,重复性更好。该法制备的感受态细胞可贮存于-70℃,但保存时间过长会使转化效率在一定程度上受到影响。1、从于37℃培养16-20小时的新鲜平板中挑取一个单菌落(直径2-3mm),转到一个含有100ml LB或SOB培养基的1L烧瓶中。于37℃剧烈振摇培养约3...
cacl2法,大肠杆菌
感受态制备与
转化,
卫星斑出现的原因?
答:
抗生素浓度过低、或者培养时间过长。卫星斑出现时因为主斑把周围的抗生素都分解掉,所以周围那些没有耐药基因的细菌也可以生长起来,形成了卫星斑。
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