酵母rna的提取实验中加入3mol/lh2so4作用是破坏氢健使rna变是对的。
酵母RNA的提取
一、原理:
由于RNA的来源和种类很多,因而提取制备方法也各异,一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验室最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后,RNA即溶于上层被酚饱和的水相中,DNA和蛋白质则留在酚层中,向水层加入乙醇后,RNA即以白色絮状沉淀析出,此法能较好地除去DNA和蛋白质。
上述方法提取的RNA具有生物活性。工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA,用这2种方法所提取的核酸均为变性的RNA,主要用作制备核苷酸的原料,其工艺比较简单。浓盐法是用10%左右氯化钠溶液,90℃提取3―4h,迅速冷却,提取液经离心后,上清液用乙醇沉淀RNA。
稀碱法使用稀碱(本实验用0.2%NaOH溶液)使酵母细胞裂解,然后用酸中和,除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA(本实验)或调pH2.5利用等电点沉淀。提取的RNA有不同程度的降解。酵母含RNA达2.67―10.0%,而DNA含量仅为0.03―0.516%,为此,提取RNA多以酵母为原料。
二、操作步骤:
1.RNA的提取:置4g干酵母粉于100ml烧杯中,加入0.2%NaOH溶液40ml,沸水浴加热30分钟,经常搅拌。加入乙酸数滴,使提取液呈酸性(石蕊试纸),离心10―15分钟(4000r・min-1)。
取上清液,加入95%乙醇30ml,边加边搅。加毕,静置,待完全沉淀,过滤。滤渣先用95%乙醇洗2次(每次约10ml),继用无水乙醚洗2次(每次10ml),洗涤时可用细玻棒小心搅动沉淀。乙醚滤干后,滤渣即为粗RNA,可作鉴定。
2.鉴定:取上述RNA约0.5g,加10%硫酸液5ml,加热至沸1―2分钟,将RNA水解。
(1)取水解液0.5ml,加苔黑酚―FeCl3试剂1ml,加热至沸1分钟,观察颜色变化。
(2)水解液2ml,加氨水2ml及5%硝酸银溶液1ml,观察是否产生絮状嘌呤银化合物(有时絮状物出现较慢,可放置十几分钟)。