细胞壁多少温度融化

Question

如题所述

Answer 1

细胞通常储存在液氮中，其温度可达-196℃，在理论上，只要保持这样的低温条件，细胞的储存时间几乎是无限的。冻存与复苏细胞的基本原则是慢冻快融，这种方法已被实验证明能够最大限度地保持细胞活性。本文将重点介绍原代细胞的冻存与复苏步骤。
1. 检查
在收到细胞株包裹时，立即检查细胞株冷冻管是否有解冻的迹象。若有，应立即处理并向寄送方通报。细胞株应尽快开始培养，或直接冷冻保存（置于-70°C），隔夜后再转移到液氮罐中保存。
2. 冷冻细胞的解冻方法
a. 方法一：
1. 准备一个37°C的水浴锅，并预热至37°C。
2. 准备一个T25培养瓶，并加入10ml完全培养基（培养基量需大于冻存液10倍体积）。
3. 取出冻存细胞管，用一次性PE手套包裹，迅速放入水浴锅中，确保在1分钟内完全融化。
4. 取出冻存管，用酒精喷洒消毒后擦干，然后置于超净台上。
5. 吸取冻存管中的细胞悬液，加入步骤2中准备好的T25培养瓶中，采用8字摇匀法缓慢摇匀。
6. 将培养瓶放入37°C的CO2恒温培养箱中，静置培养24小时后，更换新鲜培养基（注意贴壁细胞与悬浮细胞的操作方法不同）。
b. 方法二：
1. 准备一个37°C的水浴锅，并预热至37°C。
2. 准备一个15ml无菌离心管，并加入10ml完全培养基（培养基量需大于冻存液10倍体积）。
3. 准备实验所需的培养板或培养器皿。
4. 取出冻存细胞管，用PE手套包裹，迅速放入水浴锅中，确保在1分钟内完全融化。
5. 取出冻存管，用酒精喷洒消毒后擦干，然后置于超净台上。
6. 吸取冻存管中的细胞悬液，加入步骤2中准备好的15ml无菌离心管中，轻轻吹打混匀。
7. 将离心管中的细胞悬液按实验需求接种到实验器皿中（确保接种密度不低于2×10^4/cm²），然后放入37°C的CO2恒温培养箱中，静置培养24小时后，更换新鲜培养基（注意贴壁细胞与悬浮细胞的操作方法不同）。