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以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆一个编码动物激素的基因,并使之在大肠杆中表达,通常遇到的问题是什么?
如题所述
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推荐答案 2023-04-21
【答案】:要使动物中编码激素的基因在大肠杆菌中表达,通常遇到的问题有:
(1)必须利用原核细胞的表达调控原件。如细菌的RNA聚合酶不能识别真核生物的启动子。
(2)大多数真核基因有内含子,这些内含子在转录后从前体mRNA中被切除而形成成熟mRNA。细菌细胞没有这样的机制来去除内含子。
(3)没有翻译后的加工和修饰系统。
(4)产生的真核生物的蛋白质产物可以被细菌的蛋白酶所识别和降解。
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以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆一个编码
蛋白
的基因,并使之在大肠杆
菌...
答:
[操作步骤 操作步骤] 操作步骤 1、通过 PCR 方法获得目的基因:以含目的
基因的克隆质粒
为模板,按基因 序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点,本实验中为 BamHⅠ和 HiindⅢ) ,PCR 循环获得所需基因片段。 PCR 反应体系为: 模板 (含 R 基因的重组质粒) 上游引物 PR1 下...
1
、如何
以大肠杆菌的质粒DNA为载体克隆一个编码动物
的技术
的基并使之
...
答:
最大的问题应该是:
大肠杆菌
是原核生物,
动物基因
是真核基因,直接用限制酶切获得的基因在大肠杆菌内
表达
会错误,应该选择动物的相应基因的mRNA反转录得到DNA,或者根据相应蛋白质的氨基酸排列顺序推测DNA的碱基序列获得DNA。其余的如楼上后面所答。
简述利用
DNA
重组技术
在大肠杆菌
细胞中
克隆
外源
基因
的基本过程?
答:
利用
DNA
重组技术
在大肠杆菌
细胞中克隆外源基因的基本过程通常包括以下步骤:DNA提取:从源生物体中提取所需的外源DNA片段,可以通过PCR扩增、酶切等方法获取特定的DNA序列。载体准备:选择适当的
载体,
常用的是质粒(plasmid)。质粒是环状的DNA分子,可以在细菌细胞中自主复制。将质粒进行线性化处理
,通常
通过...
有关
大肠杆菌质粒载体的
构建策略包括哪些
答:
1、
克隆质粒载体的
构建:首先将目的
基因的编码
序列与质粒载体的复制子序列连接,构建出重组质粒。然后通过转化将重组质粒导入
大肠杆菌中,
筛选出含有重组
质粒的
菌落。2、
表达质粒载体的
构建:将目的基因的编码序列与表达调控序列(如启动子和转录终止信号序列)连接,构建出表达质粒。然后将表达质粒导入大肠杆菌...
如何
以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆
人的P53
基因
?并作最终鉴定。_百度知 ...
答:
然后反转录。将反转录的总c
DNA作为
模板,通过PCR 特异的P53引物
,克隆
出这个基因 然后凝胶电泳分离纯化PCR产物;然后将该PCR产物插入到带有抗性
的大肠杆菌质粒中
。涂板后,筛选阳性克隆数个,再用酶切作鉴定,找到合适的质粒;最后再将该质粒进行测序。确定该质粒无突变。
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以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆
如何以大肠杆菌质粒dna为载体
大肠杆菌的质粒提取用什么菌
一个大肠杆菌有几个质粒
大肠杆菌质粒载体
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大肠杆菌质粒的提取
大肠杆菌是真核还是原核
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