方法学cba和免疫印迹哪个好

Question

如题所述

Answer 1

个人觉得免疫印迹法好。CBA法与免疫印迹法(又称ELISA法)检测的细胞因子都是分泌到细胞外的游离状态的细胞因子，所以它们的样品都是细胞培养上清或者血清。当检测某种细胞分泌细胞因子的能力时，首先需要纯化这种细胞，然后在体外培养一段时间，收集上清后再检测，所以，CBA法与ELISA法较为相似。所不同的是，CBA法利用的荧光技术得到检测结果，ELISA法利用的是酶使底物显色后比较颜色的深浅得到检测结果。
检测细胞因子的技术大致可分为3类：生物活性检测法、免疫学细胞因子直接定量法、分子杂交检测法。但因分子杂交检测法及生物活性检测法所要求的实验室条件较高，目前多数采用抗原检测的经典方法——ELISA法。ELISA虽操作简单，但一次只能检测一种细胞因子，需要抗原包被，样本需求量大，实验时间大于24小时，且有酶-底物的背景干扰，无法反映细胞因子之间的网络关系。运用流式细胞仪CBA技术可以同时检测多重细胞因子，为多参数检测，不需要对每一种细胞因子分别进行检测。流式细胞仪自动检测，标准曲线自动生成，操作快速、简便，精确性高、可重复性好；样本用量少；无酶-底物背景干扰；具有高通量特点，单次CBA实验比单次ELISA所需时间短，但可以得到相当于7次ELISA实验的数据结果；可通过多种细胞因子的检测比较全面地反映患者的免疫状态与疾病进展的相关性，能较为准确和客观地评价体内细胞因子动态变化，因此具有较高的科研及临床推广价值。本法可应用于眼泪等来源珍贵的微量样本（5～10μl），及血清、血浆或培养液上清等样本检测；或研究细胞凋亡等信号传导通道蛋白；用于各种免疫性疾病的研究、疾病诊断、预后判断、病程检测、疾病监控、药物研发，疫苗研究、免疫功能评价等。
但是，CBA法在定量检测方面不如ELISA法准确，虽然CBA法发展较快，但是ELISA法定量操作简单，而CBA法步骤较多，而且在准确性方面不如经典的ELISA法。在价格方面，ELISA法也比CBA法经济得多。CBA法一次可以同时测定多种细胞因子，但在实际研究中，公司提供的CBA试剂盒并不能满足实验者的要求，因为试剂盒中检测的细胞因子种类是公司事先确定的，可能其中有些细胞因子不是实验者需要检测的，而有些需要检测的细胞因子并不包括在内；当只需要检测一种或者两种细胞因子时，使用CBA法就更不经济了。所以，当检测的细胞种类较多或检测细胞亚型的细胞因子时可以选用CBA试剂盒，如检测Th1、Th2或者Th17的细胞因子分泌情况时，就可以选择CBA试剂盒。