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目的基因导入后不表达的原因
为什么载体中插入
目的基因后不
会影响其原有的
基因的表达
?
答:
很长的,没有
表达
意义的序列非常多,真核生物
基因
转录下的MRNA ,也有无用序列需要剪切组合才可用。 质粒上的基因可能会影响,但那不是重点,重点是标记基因没被破坏就好。而且大肠杆菌中有很多质粒的,你这个破坏了,其他的存在,基因也可以重复存在,细菌的
DNA
很乱套的,高中书上那是模式。
为什么有的质粒转染细胞
后不表达
答:
没有与宿主细胞的染色体整合,
目的基因
被破坏。首先要确定是否已成功转染,可以用带荧光的载体进行核实,如观察到荧光,这说明转染成功;其次要核实载体本身在转染前是否存在问题,之前我们也遇到过类似情况,借的别人的载体,实际载体本身有问题,当然无法
表达
;最后,要考虑转染试剂的问题,如是否过期,是否能...
为什么筛选受体细胞时根据抗性基因而不是
目的基因
答:
这里最重要的是要区别基因工程中出现的最后未成功的两种情况。一种是:
目的基因导入
了受体细胞但却没表达。(目的基因不是只要导入受体细胞就能
表达的
,它本身的表达要受到一些修饰部位影响)。第二种是:目的基因根本没有导入受体细胞。抗性基因一般是位于运载体上,它属于标记基因。选择运载体时它必需要有...
重组
基因导入
受体细胞是不是一定能
表达
不一定是为什么
答:
不一定表达。首先重组
基因导入
了受体细胞的意思是第二步构建好的含有
目的基因的表达
载体(一般情况下叫重组质粒,或者叫
目的基因表达
载体更好点)导入了受体细胞。而又因为有可能重组基因是导入了受体细胞,但是目的基因并没有和受体细胞的DNA整合到一起,或者整合到一起了但是却没有转录出相应的mRNA,也有...
只要
目的基因
进入受体细胞就能实现
表达
答:
当然错。目的基因进入受体细胞后。要能够发生转录而后进行才能进行
表达
。而且说,一般把
目的基因导入
前都会在载体上的目的基因插入前位加上启动子之类的
为什么在
目的基因
倒入受体细胞,且培养基培养后,还要检测基因是否...
答:
是。转入了不一定能在该物种内
表达
。转
基因
技术的
目的
就是最后能表达获得产品
为什么标记
基因
在转基因受体里面根本不会
表达
呢,谢谢!
答:
因为标记基因在中间被打断了,然后质粒转入大肠杆菌DH5α,IPTG诱导下就无法产生半乳糖苷酶。但是反过来,没有
导入目的基因的
质粒就能在IPTG诱导下
表达
标记基因产生半乳糖苷酶,从而分解X-gal显示蓝色。没有转基因成功的因为表达了标记基因就显示出来了,去掉后剩下的不就是转基因成功的么。
为什么
目的基因
转入受体细胞不会被细胞内限制酶水解吗
答:
因此限制性内切酶是存在于细菌体内的。如果受体细胞是动物植物细胞,就不存在限制酶,当然不会水解。如果是细菌,现在很多限制酶的切割序列已经清楚了,因此在
导入
受体细胞的时候会考虑到受体细胞中有没有限制酶会切割
基因表达
载体,从而选择不能水解基因表达载体的细菌当做受体菌。
人的胰岛素
基因不
能在大肠杆菌中
表达
成功
的原因
是
答:
原核基因与真核基因结构不相同 :原核基因编码区连续 得到
目的基因
(人的胰岛素基因)后,去除其内含子,再与运载体结合,
导入
受体细胞大肠杆菌后,才能
表达
质粒转染细胞后,
不表达的原因
有哪些
答:
首先要确定是否已成功转染,可以用带荧光的载体进行核实,如观察到荧光,这说明转染成功;其次要核实载体本身在转染前是否存在问题,之前我们也遇到过类似情况,借的别人的载体,实际载体本身有问题,当然无法
表达
;最后,要考虑转染试剂的问题,如是否过期,是否能正常工作等。
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