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tris缓冲曲线
如何配置半胱氨酸中巯基含量的标准
曲线
答:
1. 准备试剂:半胱氨酸(Cys)、DTNB(Ellman's reagent)、
Tris
-HCl
缓冲
液(0.25M)、甲酸等。2. 准备样品:准备不同浓度的半胱氨酸溶液,可以用甲酸溶解。3. 配置标准
曲线
:分别取0、0.5、1、2、3、4、5μmol的Cys与10mMDTNB标准液(0.1mM)混合,加入适量Tris-HCl缓冲液(0.25M),使总...
为什么甘氨酸在聚酰胺中跑得快一些
答:
Tris
-甘氨酸系统是目前使用最多的
缓冲
系统。如果要测定糖蛋白的分子量,最好采用Tris-硼酸盐缓冲系统,对于分子质量小于15 kDa的蛋白样品,可以使用SDS-尿素系统,也可以采用Tris-tricine缓冲系统。积层胶(或称浓缩胶)的作用原理?在缓冲系统中的弱酸,如甘氨酸,在pH6.7时很少解离,其有效泳动速率很低,而氯离子却有很高的...
如何选择合适的蛋白含量测定方法
答:
选择一种蛋白测定方法时,需要考虑两个重要因素:
缓冲
液的化学组成和检测的蛋白量。基于dford方法的Quick Start Bradford和Bio–Rad 蛋白测定灵敏度高,可以兼容糖、巯基乙醇、DTT等。而对于去污剂和NaOH这两种干扰Bradford测定的物质,DC蛋白测定却可以兼容。如果蛋白是在loading buffer中,准备跑1D或2D电泳...
酶的活性高低与底物浓度有关吗??
答:
图17-4 各种
缓冲
液的温度及ph的关系
tris
:三羟甲基氨基甲烷0.1mol/l tra:三乙醇胺0.1mol/l 三种不同缓冲液不仅最适ph不一样,最大反应速度也有差异,从测定酶活性浓度角度,应该选用枸橼酸缓冲液,类似现象在大多数酶都能观察到,仅是程度不同,其中以碱性磷酸酶活性受到缓冲液种类影响最为显著,在二乙醇胺缓冲液所...
蛋白质含量的测定方法
答:
紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1~10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有:硫酸铵、
Tris缓冲
液和某些氨基酸等。四、BCA法:实验原理:BCA检测法是Lowry测定法的一种改进方法。与Lowry方法相比,BCA法的操作更简单,试剂更加...
考马斯亮蓝法测蛋白质时为什么浓度越高而吸光度越低
答:
吸光值是正的,浓度是负的话,应该和你做的标准
曲线
有关系,建议重新做下标准曲线,r值最起码得有两个9吧。还有就是,你的蛋白浓度肯定比较低,所以你可以把标准品做个浓度比较低的曲线。
folin-酚法有哪些干扰作用?为什么?应如何注意?
答:
1.干扰物质 此法是在Folin-酚法的基础上引入双缩脲试剂,因此凡干扰双缩脲反应的基团,如-CO-NH2,-CH2-NH2,-CS-NH2以及在性质上是氨基酸或肽的缓冲剂,如
Tris缓冲
剂以及蔗糖,硫酸铵,巯基化合物均可干扰Folin-酚反应。此外,所测的蛋白质样品中,若含有酚类及柠檬酸,均对此反应有干扰作用。而...
生物破胶酶的发酵生产及其破胶性能研究
答:
破胶酶发酵结束后,将发酵液在转速5000~10000rpm情况下离心30min去除菌体,并用0.22μm滤除去残余菌体和不溶物质,将获得的粗酶液经琼脂糖层析柱(20mm×250mm)洗脱:层析柱以pH=7.3的
Tris
-HCl
缓冲
液平衡后以0.5~1.5mol的NaCl溶液进行梯度洗脱,洗脱速率为5~15mL/h,收集酶液并用饱和硫酸铵溶液沉淀,将获得的破...
怎样用双缩脲法测定蛋白质?
答:
①标准
曲线
的绘制:以采用凯氏定氮法测出蛋白质含量的样品作为标准蛋白质样。按蛋白质含量40 mg、50 mg、60 mg、70 mg、80 mg、90 mg、100 mg、110 mg分别称取混合均匀的标准蛋白质样于8支50 mL纳氏比色管中,然后各加入1 mI。四氯化碳,再用碱性硫酸铜溶液准确稀释至50 mL,振摇10 min,...
怎么看一个公司代测的ELISA试剂盒准不准
答:
ELISA试剂盒灵敏性判断的话,因为各种ELISA试剂盒的机能之间没有明显的水平差异,但是在InBios试剂盒检测到的数据体现愈甚的原尺度低(P / N <10)以及介质(10≤P / N <20)CDC JEV IgM抗体阳性标本的XCyton套件。不乱性包含长期不乱性,开盖不乱性,运输不乱性,有必要还要添加热加速不乱性等。...
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