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SDS考马斯亮蓝法
考马斯亮蓝法
的干扰因素
答:
考马斯亮蓝法
主要是用来测定蛋白质浓度的,它的干扰因素包括:1. 有一些物质会干扰考马斯亮蓝法,主要的干扰物质有:去污剂、Triton X-100、十二烷基硫酸钠(
SDS
)和0.1N的NaOH。2. Bradford法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差,在制作标准曲线时通常选用g—球蛋白为标准蛋白质,以减少这方面的偏差...
用
考马斯亮蓝法
测定蛋白质含量是什么?
答:
000μg/ml,是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。考马斯亮蓝有g250和r250两种。其中考马斯亮蓝g250由于与蛋白质的结合反应十分迅速,常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝r250与蛋白质反应虽然比较缓慢,但是可以被洗脱下去,所以可以用来对电泳条带染色。
考马斯亮蓝法
测定蛋白质含量流程 该方法用于...
考马斯亮蓝
G250和R250的区别是什么?
答:
1、
考马斯亮蓝
R250是通过范德瓦尔键与蛋白质结合,染色灵敏度比氨基黑高5倍,适用于
SDS
电泳微量蛋白质染色。2、考马斯亮蓝G250在三氯乙酸中不溶而成胶体,能选择地染色蛋白而几乎无本底色,所以常用于需要重复性好和稳定的染色,适于作定量分析。考马斯亮蓝R250 和G250其他的区别:1、参数不同 考马...
考马斯亮蓝法
测定蛋白质标准曲线
答:
1.
考马斯亮蓝
试剂:考马斯亮蓝G一250100mg溶于50ml95%乙醇,加入100ml85%H;PO4,加蒸馏水稀释至 1000ml滤纸过滤。最终试剂中含0.01%(W/V)考马斯亮蓝G-250.4.7%(W/V)乙醇,8.5%(W/V)HPO4。2.标准蛋白质溶液:纯的牛血清血蛋白,预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量,根据其纯度同0.15...
如何提高
考马斯亮蓝
染色法的准确性
答:
可用于
SDS
-PAGE 或非变性PAGE蛋白电泳的快速染色,提高准确性,或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。
考马斯亮蓝
G250染色可以同时固定和染色,因此能立即观察显色结果,可用来确定电泳时间,观察初步结果。考马斯亮蓝R250染色灵敏度比G250髙得多,但对酸溶蛋白、醇溶蛋白不合适,因为在染色过程中,蛋白...
蛋白质的测定bradford法是什么?
答:
bradford法测定蛋白质含量,也就是
考马斯亮蓝法
,其原理是考马斯亮蓝在游离状态下呈棕红色,最大光吸收在488nm; 当它与蛋白质结合后变为蓝色,蛋白质—色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝结合在2min左右的时间内...
考马斯亮蓝
测定蛋白质含量时应注意什么?
答:
测定中蛋白-染料复合物会有少部分吸附于比色杯壁上,测定完后可用乙醇将蓝色的比色杯洗干净。利用
考马斯亮蓝法
分析蛋白必须要掌握好分光光度计的正确使用,重复测定吸光度时,比色杯一定要冲洗干净,制作蛋白标准曲线的时候,蛋白标准品最好是从低浓度到高浓度测定,防止误差。
用
考马斯亮蓝法
时如何避免误差
答:
考马斯亮蓝
测定蛋白质浓度是较常用的方法,误差可尽量减到最小,需注意:测定od值前,将分光光度计提前预热至少30分钟,可保证准确性;配制好的考马斯亮蓝溶液应放于4度保存备用;盐离子不会影响实验结果,但去污剂,如triton x-100,
sds
等,会严重干扰实验结果。1.由于此方法十分灵敏,因此,所用器皿...
考马斯亮蓝法
测蛋白质含量是多少?
答:
考马斯亮蓝法
测蛋白质含量是0~1 000μg/mL。考马斯亮蓝一定范围内与蛋白质浓度成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。测定含量:该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的,但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0.2%影响测定结果,如TritonX-100、
SDS
、NP-40等...
SDS
干扰
考马斯亮蓝
的原理
答:
SDS
干扰
考马斯亮蓝
的原理是根据蛋白质可与考马斯亮蓝G-250 定量结合。
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