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蛋白质纯度测定方法
蛋白质纯度
的
测定方法
有哪些?
答:
双缩脲法(Biuret法):灵敏度低1~20mg
,中速20~30分钟 紫外吸收法:较为灵敏50~100mg,快速5~10分钟
Folin-酚试剂法
(Lowry法):灵敏度高 5mg,40~60分钟,操作要严格计时;颜色深浅随不同蛋白质变化 考马斯亮蓝法(Bradford法):灵敏度最高1~5mg,15分钟,常用 分子量测定:SDS-PAGE:还原SDS...
为什么标准
蛋白质
必须用凯氏定氮
法测定纯度
答:
首先,因为蛋白质当中含有氮,而且因为氮的含量与蛋白质的含量几乎呈线形相关,
所以标准蛋白质通常用凯氏定氮法测定纯度
。生物材料的含氮量测定在生物化学研究中具有一定的意义,如蛋白质的含氮量约为16%,测出含氮量则可推知蛋白含量。生物材料总氮量的测定,通常采用微量凯氏定氮法。凯氏定氮法由于...
说明常用
蛋白质测定方法
的原理,并对各种方法加以比较
答:
双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法
,硫铵不干扰显色, Cu2+与蛋白质的肽键,以及酪氨酸残基络合,形成紫蓝色络合物,此物在540nm波长处有最大吸收。利用标准蛋白溶液和双缩脲试剂绘制标准曲线,将待测血清与硫酸钠在待测试管中混合,并只加入硫酸钠不含血清的试管作对照,将两支试管加入...
用什么进行
蛋白质纯度
的鉴定
答:
完成一个样品的
测定
,只需要5分钟左右。由于染料与
蛋白质
结合的过程,大约只要2分钟即可完成,其颜色可以在1小时内保持稳定,且在5分钟至20分钟之间,颜色的稳定性最好。因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间。(3)干扰物质少。如干扰Lowry法的K 、Na 、Mg2 离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、...
鉴定
蛋白质
纯化产品的
纯度
,有哪些常用
方法
答:
常用色谱法
,通过标准品对照图谱进行,分析包括分子筛(大小)、亲和层析(特异性结合)、离子交换(带电性)、疏水(水溶性);或是沉淀法,包括等电点沉淀、差速离子心沉淀、盐析沉淀、亲和沉淀;透析超滤法;电泳法。这些法说不上常不常用 ,都是根据要分析的蛋白性质决定的。
如何用高效液相色谱(HPLC)进行
蛋白质
的
纯度检测
及含量测定?或者测分 ...
答:
首先,
蛋白质
的
测定
一般用凝胶渗透色谱 分子量测定:用HPLC测定几个分子量已知的蛋白质,绘制分子量与调整保留时间相对应的标准曲线,然后再在相同条件下测未知蛋白的保留时间,用标准曲线对照即可的未知蛋白的分子量;含量测定:用蛋白质标样配制一系列不同浓度的蛋白质溶液,绘制蛋白质浓度与峰高/峰面积...
简述
蛋白质
分离纯化与鉴定的主要
方法
有哪些?其特点是什么?
答:
③亲和层析法(aflinity chromatography)是分离
蛋白质
的一种极为有效的
方法
,它经常只需经过一步处理即可使某种待提纯的蛋白质从很复杂的蛋白质混合物中分离出来,而且
纯度
很高。这种方法是根据某些蛋白质与另一种称为配体(Ligand)的分子能特异而非共价地结合。其基本原理:蛋白质在组织或细胞中是以复杂...
蛋白质
含量
测定方法
有哪些?
答:
灵敏度最高,能
检测
到纳克水平。二、
蛋白质纯度
鉴定 1.蛋白质纯度鉴定通常采用物理化学的
方法
。例如等电聚集、聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS-PAGE、毛细管电泳以及沉降分析等。2.如果制品是纯的,在这些分析的图谱上只呈现一个峰或一个条带。3.任何单独一种鉴定只能认为是蛋白质分子均一性的必要条件而不是...
如何利用SDS-PAGE判定
蛋白质
的
纯度
和分子量
答:
SDS-PAGE判定
蛋白质
的
纯度
:若该蛋白质是单肽链蛋白质,则电泳得到的只有一条蛋白带(两条色带:一条为溴酚蓝,一条为蛋白带);若得出多条电泳带,则应该用非SDS-PAGE进行电泳,得出单一蛋白带则为单一蛋白质 SDS-PAGE判定蛋白质的分子量:定义:R=de/do R为迁移率,de为蛋白质电泳迁移距离,do...
如何准确
测定
样品中
蛋白质
的含量
答:
(1)试剂:a、标准蛋白质溶液:用标准的结晶牛血清清蛋白或标准酪蛋白,配制成10mg/ml的标准蛋白溶液,可用bsa浓度1mg/ml的a280为0.66来校正其纯度。 如有需要,标准蛋白质还可预先用微量
凯氏定氮法
测定蛋白氮含量,计算出其纯度,再根据其纯度,称量配制成标准蛋白质溶液。牛血清清蛋白用0.9%nacl配制,酪蛋白用0.05n ...
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