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大肠杆菌转染质粒
为什么不是所有的
大肠杆菌
都成功转入了
质粒
答:
影响转化效率的因素很多,主要有:感受态细胞制备的质量、受体菌生长期(
大肠杆菌
在对数生长期易产生感受态)、
质粒
的大小和构型、所用试剂的纯度、接种前菌种的保藏方式、冰浴时间(延长冰浴时间可略微提高转化率)、器皿的清洁度、化合物及无机离子(Rb+、Mn+、二甲基亚砜能适当提高转化率)、质粒与细胞...
质粒转染
的
大肠杆菌
为什么要挑选单克隆?
答:
因为我们挑的是菌落,而一般我们认为一个菌落就是又一个细菌繁殖产生的。所以菌落内的细菌都是同一基因型(也就是说要不然都带有
质粒
,要不然都没有或者是其他质粒),也就是说要挑单克隆。如果挑的不是单克隆,那么菌落内的细菌的种类就会不同,有的有质粒,有的没有,有的带其他质粒。这样的话,我...
大肠杆菌
提
质粒
要摇多久
答:
12小时。
大肠杆菌提质粒
需要将转染过的大肠杆菌放进AMP-LB液体培养基,将摇瓶放置于37℃恒温培养箱中培养12小时,通过离心力将大肠菌沉淀到培养基的底部,倒掉上清后,用冰的75%乙醇洗沉淀,除去上清后,用氯化镁溶液沉淀RNA,提取质粒。
质粒
pet28a怎样
转染大肠杆菌
e.coli
答:
1、 制备含有Amp抗生素的LB平板。2、 取一个1.5ml离心管,加入100μl感受态细胞悬液,置冰上:加入20ul
质粒
T+G(提取的质粒DNA稀释500X),用移液器轻柔混匀。冰上静置20min。3、 42℃水浴中热激90秒,然后迅速置冰上3~5min。整个过程不要振荡菌液。4、 加入1ml LB液体培养基(不含抗生素),...
大肠杆菌
感受态细胞的制备及
质粒
的转化结果怎么分析?
答:
材料及方法 菌种:
大肠杆菌
BL21菌株
质粒
:pGEX-6P-1感受态制备方法:CaCl2法 转化方法:热激法 CaCl2制备感受态的原理。细菌处于0·C,CaCl2的低渗溶液中,菌细胞膨胀成球形,转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面,经42·C短时间热冲击处理,促使细胞吸收DNA复合物。感受...
用什么方法可以得到
大肠杆菌
的
质粒
?
答:
p1:葡萄糖使悬浮后的
大肠杆菌
不会快速沉积到管子的底部;EDTA是Ca²⁺和Mg²⁺等二价金属离子的螯合剂,其主要目的是为了螯合二价金属离子从而达到抑制DNase的活性;可添加RNase A消化RNA。p2:此步为碱处理。其中NaOH主要是为了溶解细胞,释放DNA,因为在强碱性的情况下,细胞膜...
大肠杆菌
的转化原理及方法
答:
大肠杆菌
转化可以:(1)将重组DNA分子导入大肠杆菌受体细胞进行复制,增殖和表达,以获得目的基因;(2)验证大肠杆菌感受态细胞效果;(3)用于分子生物学其他研究。实验方法原理:
质粒
DNA或重组DNA粘附在细菌细胞表面,经过42°C短时间的热击处理,促进吸收DNA.然后在非选择培养基中培养一代,待质粒上所...
质粒
导入
大肠杆菌
要用什么处理该菌,以使其处于什么细胞状态,从而吸收D...
答:
将
大肠杆菌
用氯化钙处理,以增大大肠杆菌细胞壁的通透性,使含有目的基因的重组
质粒
能够进入受体细胞,此时的细胞处于感受态(理化方法诱导细胞,使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态)。
如何把
质粒
转入
大肠杆菌
中
答:
用感受态的细胞法。即用Ca2+处理,使
大肠杆菌
处于感受态很容易吸收周围的DNA,再将大肠杆菌与
质粒
混合培养,就转人。
当
质粒
转化进
大肠杆菌
时,通过什么原理表达目的基因
答:
当
质粒
转化进
大肠杆菌
时,通过DNA复制原理表达目的基因。CaCl2对特定的大肠杆菌处理,制备感受态的细菌。这些细菌可使每微克超螺旋质粒DNA,如一些插入目的DNA片段的重组质粒,产生5×106~2×107 个转化的菌落。当质粒与这些大肠杆菌混合后,质粒粘附在大肠杆菌的表面,在42℃的温度时,大肠杆菌出现热休克,...
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