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大肠杆菌转化步骤解析
如何进行
大肠杆菌
的
转化
实验?
答:
在超净工作台上,向每个试管中加入500 μl不含抗菌素的LB培养基,轻轻搅拌后固定在37℃恒温摇床上震荡1小时
。 取100-300 μl转化混合液,均匀滴到含抗菌素的LB平板上,用酒精灯消毒过的涂布棒涂抹。 如果进行蓝白斑筛选,滴完菌液后在平板上加40 μl 2% X-gal和8 μl 20% IPTG,再次涂抹。
大肠杆菌
的
转化
原理及方法
答:
实验
步骤
一、实验材料准备 1. 器材 旋涡混合器,微量移液取样器,移液器吸头,1.5 ml 微量离心管,双面微量离心管架,干式恒温气浴(或恒温水浴锅),制冰机,恒温摇床,培养皿(已铺好固体LB-Amp),超净工作台,酒精灯,玻璃涂棒,恒温培养箱。2. 试剂 培养基(不加抗菌素),LB培养基(...
大肠杆菌
的
转化
原理及方法
答:
其实感受态菌先低温的作用是让DNA-CaCl2复合体粘着在菌体表面,短暂热激的作用是让菌壁通透性改变,再经过2min左右冰上静置,附着在表面上的DNA就进入菌体了。以上就是
大肠杆菌
的
转化
过程。大肠杆菌的简介 人和动物肠道中最常见的一种细菌,主要寄生于大肠内,约占肠道菌中的1%。是一种两端钝圆、能运动...
大肠杆菌
感受态细胞的制备及质粒的
转化
结果怎么分析?
答:
转化
率 转换后的含抗生素的平板上长出的菌落即为转化,根据平板中的菌落数可以计算出转化子总数的转化频率,公式如下。转化指总数=菌落数x稀释倍数x转化反应原液总体积/涂板菌液体积 转化的频率(转化子数/每ug质粒DNA)=转化子总数/质粒DNA加入量(ug)转化子总数=Nx1x200/200=N 转化频率=N/10-4...
大肠杆菌
发生基因重组来自
转化
还是转导
答:
大肠杆菌细胞最常用的转化方法是:首先用钙离子处理细胞,使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态(本质上是使细胞壁的通透性增加)
,这种细胞成为感受态细胞。第二步是将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子(即提高基因的导入率),完成转化过程...
电
转化
感受态细胞原理
答:
电
转化
法制备
大肠杆菌
感受态细胞的实验
步骤
1、前夜接种受体菌(DH5a或DH10B),挑取单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜。2、取2ml过夜培养物转接于200ml LB培养基中,在37℃摇床上剧烈振荡培养至OD600=0.6(约2.5-3小时)。3、将菌液迅速置于冰上。以下步骤务必在超净工作台和冰上操作。注意的...
3.如何用CaCl2法对
大肠杆菌
细胞进行
转化
?如果转化的基因是青霉素抗性基 ...
答:
先配置培养基培养
大肠杆菌
,培养一段时间后,向培养基加入CaCl2和载有目的基因的
转化
质粒继续培养一段时间后筛选已转化的菌种。在培养基配置过程中加入青霉素
用钙离子处理
大肠杆菌
,可提高基因的导入率
答:
大肠杆菌
细胞最常用的
转化
方法是:首先用钙离子处理细胞,使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态(本质上是使细胞壁的通透性增加),这种细胞成为感受态细胞。第二步是将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子(即提高基因的导入率),完成转化...
大肠杆菌
发酵原理
答:
其发酵主要通过以下过程进行:1.糖类代谢:
大肠杆菌
能够通过糖类代谢产生ATP,并且通过代谢产生的氢离子和电子,将存在于细胞质膜上的细胞色素氧化酶还原为细胞色素。2.产生有机酸:当大肠杆菌以糖类作为碳源时,会产生大量的有机酸。其中乳酸、乙酸、丙酸等是主要的有机酸。这些有机酸不仅可以抑制其他菌群...
谁做过酶切质粒的实验啊,制感受态细胞然后
转化
呢?求详细过程及注意要点...
答:
转化
的质粒 DNA 的质量和浓度。试剂的质量。防止杂菌和其它外源 DNA 的污染。 实验仪器 离心设备 实验试剂
大肠杆菌
DH5αLB培养基,0.1mol/LCaCl2溶液(预冷)氨苄青霉素pUC18质粒 实验
步骤
菌株活化:1.用接种环直接取冻存的大肠杆菌DH5α,在LB培养基平板表面划线,于37℃培养16小时2.挑取一个单菌落,转到3-5mlLB...
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