切胶回收样品上样时会和溴酚蓝一起漂浮起来，无法电泳检测，是怎么回事呢？

今天做了一把切胶回收遇到了奇怪的现象：回收后的样品准备跑电泳，但上样时发现样品和上样缓冲液混合物沉不下去，会浮起来，这样就没办法电泳，是怎么回事呢？
我用的TIANGEN的切胶回收试剂盒，回收前电泳上样时150~200uL的PCR产物，洗脱回收液使用的是专门把pH值配到7.5~8.0之间的去离子水，第一步溶胶液离心时有发现离不下去的现象，但再加一点PN溶胶液也都能离下去，PW漂洗了两次，但漂洗后没有空转离心去除残留的PW。切胶回收样品上样时发现样品会和溴酚蓝一起漂浮起来，无法沉降到胶孔底部，无法进行电泳检测。是什么引起回收样品无法上样的呢？真是怪了。。。

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其他回答

第1个回答 2011-08-06

和你的样品没关系，loading buffer没配好，溴酚蓝里面要加蔗糖

第2个回答 2011-08-06

1、Loading Buffer建议用takara配送的，稀释到2X用；
2、回收后的样品里的酒精可能没有去除完全本回答被提问者采纳

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wb电泳上样量大后胶上有蓝色答：wb电泳上样量大后胶上有蓝色原因是部分样品未完全溶解有沉淀。沉淀也被溴酚蓝染色，故电泳时加样孔里会有残留的蓝色。这对做western并没有影响，可以直接把浓缩胶部分切掉只做分离胶部分的转膜，那么残留的蓝色就不会影响到转膜的效果。

做western跑电泳时加样孔里为什么会有残留的蓝色答：可能的原因是部分样品未完全溶解有沉淀，沉淀也被溴酚蓝染色，故电泳时加样孔里为什么会有残留的蓝色这对做western并没有影响，可以直接把浓缩胶部分切掉只做分离胶部分的转膜那么残留的蓝色就不会影响到转膜的效果

sds_page电泳时为何有一些会在溴酚蓝前边,感觉像是漏了,是怎么回事答：有些分子量小的蛋白在考马斯亮蓝染色后会在溴酚蓝前边，溴酚蓝在12%sds-page中，是在10kD左右的位置

...会在浓缩胶中被压成层?为什么在样品中加入溴酚答：分离胶的孔径较小所以蛋白质在浓缩胶中快速运动，到分离胶时速度变慢，就被压到一块了。加溴酚蓝其实是加上样缓冲液，这个缓冲液比重大，可以让蛋白下沉到点样孔底部，防止漂样。当然上样缓冲液中的溴酚蓝还有指示剂的作用，因为他分子小所以跑得快可以起指示作用，防止蛋白跑出胶片。

western 电泳时,大分子mark不显是怎么回事答：SDS的纯度可能也有关系。丙烯酰胺的浓度，交联度合适不合适。做胶的时候各种溶液是否加的正确，胶的浓度是否合适，电泳缓冲液的浓度，pH有无问题。 marker是不是时间太长了。做western跑电泳时加样孔里会有残留的蓝色，是因为有残留的溴酚蓝没有跑下去 可能的原因是部分样品未完全溶解有沉淀，沉淀也...

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